특징
- ioSensory Neuron은 opti-ox™ 기술을 사용하여 정밀하게 재프로그래밍된 감각세포입니다.
- revival 후 7일 이내에 pan-sensory neuron marker인 PRPH, BRN3A, ISL1 및 TUBB3 및 주요 마커의 발현을 특징으로 하는 통각수용체 정체성을 갖춘 매우 순수한(>99%) 감각 뉴런 집단을 형성합니다.
- TRPV1, TRPM3 및 TRPM8에 대한 선택적 작용제에 대한 반응성을 보이며, 기능성 통각수용체 표현형 (nociceptor phenotype)을 보여줍니다.
- 말초 신경병증에 대한 신뢰할 수 있는 만성 침해수용성 통증(chronic nociceptive pain) 연구 및 치료법 개발에 이용됩니다.
사양
Starting
material |
Human iPSC line |
Donor |
Caucasian adult male (skin
fibroblast) |
Format |
Cryopreserved cells |
Differentiation
method |
opti-ox™ cellular reprogramming |
Karyotype |
Normal (46, XY) |
Vial size |
Small: 2 x 10^6 viable cells |
Recommended
seeding density |
60,000 cells/cm2 |
Seeding
compatibility |
6, 12, 24, 96 and 384 well plates |
Quality
control |
Sterility, protein expression (ICC),
gene expression (RT-qPCR) |
프로토콜
ioSensory Neuron은 냉동 보존 형식으로 제공되며 권장 배지에서 재생 시 빠르게 성숙되도록 프로그래밍되어 있습니다.
Phase 0 단계의 세포를 수령 후, Phase 1, 2 과정을 거쳐 실험에 바로 이용합니다.
1) Phase 0 : Induction (bit.bio에서 Induction 후 제공)
2) Phase 1 : 고객이 세포를 수령 후 plating 하여 안정화시키는 기간 (7일)
3) Phase 2 : 세포가 성숙하는 기간
참고 데이터
1. opti-ox precision reprogrammed ioSensory Neurons rapidly form a homogenous neuronal population
냉동보존된 ioSensory Neuron의 해동 후, 신속하고 균질하게 뉴런세포로 성장하는 과정을 저속 촬영한 14일간의 타임랩스 비디오입니다.
![sensory-bitbio-02.png](/upload/editor/20231004124646c8c9df7f-9321-45fc-914d-e18abd6f10f8.png)
2. ioSensory Neurons express pan-sensory neuron-specific markers
revival 후 14일째에 ioSensory 뉴런의 면역형광 염색 이미지 입니다. 상단 패널은 ioSensory 뉴런이 BRN3A(빨간색), 범뉴런 마커 MAP2(녹색) 및 DAPI 대조염색(파란색)에 대해 양성임을 보여주며, 모든 MAP2 양성 뉴런이 감각 뉴런 정체성을 가지고 있음을 보여줍니다. 하단 패널은 ioSensory 뉴런이 ISL1(자홍색), PRPH(빨간색), 범뉴런 마커 TUBB3(녹색) 및 DAPI 대조염색(파란색)에 대해 양성임을 보여줍니다.
![koma-sensory_neuron_fig1.png](/upload/editor/20230727162015cd5584a6-4c88-44f8-9847-fdc21b22b107.png)
3. ioSensory Neurons show visible neuronal networks by day 7
리프로그래밍 시 세포에서 급격한 형태학적 변화가 관찰되며, 뉴런은 revival 후 4일째에 확인됩니다. 눈에 보이는 신경망은 해동 후 7일째에 관찰됩니다.
![koma-sensory_neuron_fig2.png](/upload/editor/2023072716204496e0781d-526f-45c2-8545-a1038d42559a.png)
4. Single cell RNA-sequencing shows ioSensory Neurons form a pure population (>99%) of sensory neurons
단일 세포 RNA 서열 분석은 ioSensory Neuron을 사용하여 4가지 특정 시점(7일, 10일, 14일 및 17일)에 수행되었습니다. 7일째까지, 집단은 유사분열 후 감각 뉴런의 순수 집단(>99%)을 나타내는 뚜렷한 발현 프로파일을 갖습니다. 유전자 발현은 10x Genomics scRNA 시퀀싱으로 평가되었습니다.
![koma-sensory_neuron_fig3.png](/upload/editor/2023072716211603932514-a877-4908-b2fa-064df299c9cf.png)
5. Single cell RNA-sequencing shows ioSensory Neurons express key pan-sensory neuronal markers
단일 세포 RNA 서열 분석은 ioSensory Neuron을 사용하여 4가지 특정 시점(7일, 10일, 14일 및 17일)에 수행되었습니다. 7일째에는 범감각 뉴런 마커 유전자인 ISL1, ISL2, PRPH, BRN3A와 범뉴런 마커인 TUBB3 및 MAP2의 발현이 유사분열 후 감각 뉴런에서 검출될 수 있었습니다. 유전자 발현은 10x Genomics scRNA 시퀀싱으로 평가되었습니다.
6. Single cell RNA-sequencing shows ioSensory Neurons express key nociceptor markers
단일 세포 RNA 서열 분석은 ioSensory Neuron을 사용하여 4가지 특정 시점(7일, 10일, 14일 및 17일)에 수행되었습니다. 7일째에는 유사분열 후 감각 뉴런에서 주요 통각수용기 표지 유전자(NTRK1 및 TRPV1)의 발현이 검출될 수 있습니다. 유전자 발현은 10x Genomics scRNA 시퀀싱으로 평가되었습니다.
![koma-sensory_neuron_fig5.png](/upload/editor/20230727162241cefbc2df-c221-40e8-a5d1-fe075ed33891.png)
7. ioSensory Neurons display spontaneous activity that matures over time
6일과 17일에 ioSensory Neuron의 다중 전극 배열(MEA) 기록을 보여줍니다. Activity map에는 firing rate(A), spike 진폭(B) 및 활성 전극의 %(C)가 표시됩니다. 결과는 6일부터 17일까지 신경 성숙 동안 시간에 따른 자발적인 활동 증가를 보여줍니다. 분석은 Maxwell Biosystem의 MaxTwo 다중 웰 시스템에서 수행되었습니다.
![koma-sensory_neuron_fig6.png](/upload/editor/20230727162303b4821a5a-e098-4cb4-9341-cef39b4c4cbd.png)
8. ioSensory Neurons display a functional nociceptor phenotype
TRPV1(캡사이신), TRPM3(CIM0216) 및 TRPM8(WS-12)과 같은 온도 민감성 TRP 채널을 표적으로 하는 약리학적 작용제로 ioSensory Neuron을 자극한 Calcium mobilisation imaging 입니다. 활성 흔적은 17일차에 유해 자극에 노출되었을 때 개별 세포의 세포내 칼슘 동원이 증가했음을 나타냅니다. 이는 세포가 17일 이내에 기능성 통각수용체 표현형을 갖게 됨을 나타냅니다.
![koma-sensory_neuron_fig7.png](/upload/editor/20230727162330cea6f8a4-ca51-4cd4-bb40-683978e5584f.png)
9. Calcium imaging of ioSensory Neurons demonstrates activity following treatment with a TRPM3 agonist
TRPM3 agonist인 CIM0216을 사용한 치료에 반응하여 칼슘 동원을 표시하는 ioSensory Neuron의 영상입니다.
![sensory-bitbio-03.png](/upload/editor/20231004130106e1384b5f-236c-478f-9427-fb841de9a7fc.png)