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제품 상세

Antibody

6.5 - 270 kDa 범위를 커버하는 3가지 컬러 밴드를 포함하며,
최대 100%까지의 transfer 효과를 개런티하는 Prestained protein ladder를 소개합니다.

특징 


  • ioSkeletal Myocyte는 근육, 신경근 및 관련 대사 장애 등의 연구, 질병 모델링, 대용량 스크리닝을 위한 인간근육세포 입니다.
  • 골격 근세포는 냉동 보존된 상태로 제공되며, plating 후 빠르게 성숙하여 10일 이내에, 수축하는 길쭉한 줄무늬, 다핵 근육 세포를 형성합니다. 
  • Desmin 및 MHC(Myosin Heavy Chain)과 같은 주요 근필라멘트 단백질을 발현합니다.
  • 최적화된 유도성 과발현 기술인 Opti-ox를 이용하여 iPSC에서 재프로그래밍되었습니다.


적용

  • Muscle and neuromuscular research
  • Amenable to high throughput screening
  • Contractility assays
  • 3D co-cultures


사양 

Starting material Human iPSC line
Donor Caucasian adult male (skin fibroblast)
Format Cryopreserved cells
Differentiation method opti-ox™ cellular reprogramming
Karyotype Normal (46, XY)
Vial size Small: >2.5 x 10^6 viable cells
Large: >5 x 10^6 viable cells
Recommended seeding density 100,000 cells/cm2
Seeding compatibility 6, 12, 24, 48, 96 & 384 well plates
Quality control Sterility, protein expression (ICC) and gene expression (RT-qPCR)


프로토콜

ioSkeletal Myocytes는 냉동 보존 형식으로 제공되며 권장 배지에서 재생 시 빠르게 성숙되도록 프로그래밍되어 있습니다.  
Phase 0 단계의 세포를 수령 후, Phase 1, 2 과정을 거쳐 실험에 바로 이용합니다. 
1) Phase 0 : Induction (bit.bio에서 Induction 후 제공)
2) Phase 1 : 고객이 세포를 수령 후 plating 하여 안정화시키는 기간 (3일)
3) Phase 2 : 세포가 성숙하는 기간





참고 데이터

1. ioSkeletal Myocytes generated by transcription factor-driven reprogramming of iPSCs using opti-ox technology
냉동보존된 ioSkeletal Myocytes의 해동 후, 신속하고 균질하게 골격 근세포로 성장하는 과정을 저속 촬영한 10일간의 타임랩스 비디오입니다. 



2. ioSkeletal Myocytes express skeletal myocyte-specific markers
Revival 후 10일째 면역세포화학(ICC) 염색을 통해 근육 전사인자인 Myogenin (C)과 함께 Desmin (A), Dystrophin (B), Myosin Heavy Chain (C)과 같은 수축 관련 마커의 발현을 확인할 수 있습니다. 또한 줄무늬 섬유와 다핵화(D)는 Troponin의 발현을 입증합니다. 


3. Cells demonstrate classical myocyte morphology
ioSkeletal Myocytes는 10일에 걸쳐 길쭉한 다핵 근세포를 형성합니다. (Day 1 to 10 post-thawing; 4X magnification; scale bar: 800µm)


4. In vitro human muscle cells suitable for contractility assays
Revival 후 10일째까지 세포는 아세틸콜린 첨가 시 강한 수축 반응을 보여 수축성 분석에 적합한 인간 근육 모델을 제공합니다. 지속적인 배양 중에도 자발적인 수축이 관찰됩니다. (Day 10 post-revival skeletal myocytes; 50µM acetylcholine.)



Opti-ox 기술이란? 

 

Opti-ox는  Optimized inducible overexpression Tet system을 이용하여 특정 transcriptional factor 발현을 유도하는 시스템입니다. 

         - Opti-ox는 Dual targeting cassette로 구성되어 있습니다. 

         - cassette(1)은 Dox (doxycyclin)에 의해 조절되는 transcriptional activator protein 유전자를 삽입하고

         - cassette(2)는 (1)에 의해 조절되는 transcription factor를 삽입합니다. 

         - 즉, Dox양에 의해 transcriptional activator protein 발현이 유도되고, 이에 의해 특정 transcription factor의 발현이 조절되어 원하는 cell 타입으로 리프로그래밍을 유도할 수 있습니다.  

 

Opti-ox로 분화된 세포는 

         1) Lot to Lot variation이 없습니다.

         2) Scale up production이 가능합니다.

         3) 세포 안정화 후 바로 실험이 가능하므로 실험시간을 단축시킬 수 있습니다.


주문정보

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0.5 ml Elite Pre-stained Protein Ladder (2 x 0.25 ml) PAL-EPL-500 0.5ml 500
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