특징
- ioGlutamatergic Neuron은 최적화된 유도성 과발현 기술인 Opti-ox를 이용하여 iPSC에서 재프로그래밍된 cell 입니다.
- Glutamate transporter gene인 VGLUT1과 VGLUT2의 발현을 보이는 glutamate neuron (>80%)과 cholinergic neuron marker를 발현하는 신경세포로 구성됩니다.
- RNA-seq 분석을 통해 ioGlutamatergic neuron이 rostral CNS 와 동일성을 가지며 고전적인 cortical marker 유전자인 FOXG1 및 TBR1을 발현함을 입증하였습니다.
- 바로 사용할 수 있는 타입으로 제공되어, cell-type specific biology, 제약 R&D에서 신약의 타겟 검증 및 약물 스크리닝, 독성 시험을 위한 모델로 사용됩니다.
사양
| Starting
material |
Human iPSC line |
| Donor |
Caucasian adult male (skin
fibroblast) |
| Format |
Cryopreserved cells |
| Differentiation
method |
opti-ox™ cellular reprogramming |
| Karyotype |
Normal (46, XY) |
| Vial size |
Small: 1 x
10^6 viable cells
Large: 5 x 10^6 viable cells |
| Recommended
seeding density |
30,000 cells/cm2 |
| Seeding
compatibility |
6, 12, 24, 48, 96 & 384 well
plates |
| Quality
control |
Sterility, protein expression (ICC),
gene expression (RT-qPCR) |
프로토콜
ioGlutamatergic Neuron은 냉동 보존 형식으로 제공되며 권장 배지에서 재생 시 빠르게 성숙되도록 프로그래밍되어 있습니다.
Phase 0 단계의 세포를 수령 후, Phase 1, 2 과정을 거쳐 실험에 바로 이용합니다.
1) Phase 0 : Induction (bit.bio에서 Induction 후 제공)
2) Phase 1 : 고객이 세포를 수령 후 plating 하여 안정화시키는 기간 (4일)
3) Phase 2 : 세포가 성숙하는 기간
참고 데이터
1. ioGlutamatergic Neurons generated by transcription factor-driven reprogramming of iPSCs using opti-ox technology
냉동보존된 ioGlutamatergic Neuron의 해동 후, 신속하고 균질하게 뉴런세포로 성장하는 과정을 저속 촬영한 7일간의 타임랩스 비디오입니다.
2. ioGlutamatergic Neurons express glutamatergic neuron-specific markers
Revival 후 11일째의 면역형광 염색은 pan-neuronal protein인 MAP2와 글루타메이트성 뉴런 특이적 수송체인 VGLUT2의 균질한 발현을 보여줍니다.
3. ioGlutamatergic Neurons form structural neuronal networks by day 11
ioGlutamatergic 뉴런은 빠르게 성숙하고 11일에 걸쳐 구조적 뉴런 네트워크를 형성합니다.(Day 1 to 11 post thawing; 100X magnification)
Opti-ox 기술이란?
- Opti-ox는 Optimized inducible overexpression Tet system을 이용하여 특정 transcriptional factor 발현을 유도하는 시스템입니다.
- Opti-ox는 Dual targeting cassette로 구성되어 있습니다.
- cassette(1)은 Dox (doxycyclin)에 의해 조절되는 transcriptional activator protein 유전자를 삽입하고
- cassette(2)는 (1)에 의해 조절되는 transcription factor를 삽입합니다.
- 즉, Dox양에 의해 transcriptional activator protein 발현이 유도되고, 이에 의해 특정 transcription factor의 발현이 조절되어 원하는 cell 타입으로 리프로그래밍을 유도할 수 있습니다.
1) Lot to Lot variation이 없습니다.
2) Scale up production이 가능합니다.
3) 세포 안정화 후 바로 실험이 가능하므로 실험시간을 단축시킬 수 있습니다.
사용 논문
1. Tourigny DS, Karim MKA, Echeveste R, Kotter MRN, O’Neill JS (2019) Energetic substrate availability regulates synchronous activity in an excitatory neural network. PLOS ONE 14(8): e0220937. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0220937
2. Zhou, L., Wolfes, A. C., Li, Y., Chan, D. C. W., Ko, H., Szele, F. G., Bayley, H., Lipid-Bilayer-Supported 3D Printing of Human Cerebral Cortex Cells Reveals Developmental Interactions. Adv. Mater. 2020, 32, 2002183.
https://doi.org/10.1002/adma.202002183