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제품 상세

Antibody

6.5 - 270 kDa 범위를 커버하는 3가지 컬러 밴드를 포함하며,
최대 100%까지의 transfer 효과를 개런티하는 Prestained protein ladder를 소개합니다.

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특징

  

  • 10일 내에 TMEM119, P2RY12, IBA1, CX3CR1, CD11b, CD45, CD14를 포함하여 key phenotypic marker를 90% 이상 발현합니다. 
  • phagocytosis, proinflammatory cytokine secretion등 microglia의 고유한 기능성을 가집니다.
  • Glutamatergic neuron 및 astrocyte와 공동 배양할 수 있습니다.
  • 염증성 및 퇴행성 신경 질환의 질병 모델링 및 신약 개발 등의 연구에 이용됩니다. 

  

 

적용

  • Disease modeling
  • Drug development
  • Neuroinflammation research
  • Co-culture studies
  • Transcriptome analysis

 

 

사양

 

Starting material Human iPSC line
Donor Caucasian adult male (skin fibroblast)
Format Cryopreserved cells
Differentiation method opti-ox™ cellular reprogramming
Vial size Small: 1.5 x 10^6 viable cells
Large: 5 x 10^6 viable cells
Recommended seeding density 37,000 to 39,500 cells/cm2
Seeding compatibility 6, 12, 24, 96 & 384 well plates
Quality control Sterility, protein expression (ICC), functional phagocytosis, cytokine secretion assays

  

 

프로토콜

ioMicroglia는 냉동 보존 형식으로 제공되며 권장 배지에서 재생 시 빠르게 성숙되도록 프로그래밍되어 있습니다.  
Phase 0 단계의 세포를 수령 후, Phase 1, 2 과정을 거쳐 실험에 바로 이용합니다. 
1) Phase 0 : Induction (bit.bio에서 Induction 후 제공)
2) Phase 1 : 고객이 세포를 수령 후 plating 하여 안정화시키는 기간 (1일)
3) Phase 2 : 세포가 성숙하는 기간 
4) Phase 3 : 세포를 유지하는 기간 (1일)




참고 데이터 

  

1. opti-ox precision reprogrammed ioMicroglia rapidly form a homogenous microglia population 

냉동보존된 ioMicroglia의 해동 후, 신속하고 균질하게 성장하는 과정을 저속 촬영한 10일간의 타임랩스 비디오입니다.  

 


 

 

2. ioMicroglia show key microglia marker expression 

10일차 ioMicroglia의 면역형광 염색은 P2RY12, IBA1 및 TREM2의 균질한 발현과 전형적인 가지형 형태를 보여줍니다.  

 


 

3. Phagocytosis of Amyloid Beta-42 particles by ioMicroglia  

10일차에 ioMicroglia를 Aβ42 +/- cytochalasin D로 표지된 500nM AF488과 함께 20시간 동안 배양했으며 Incucyte®에서 30분마다 이미지를 획득하고 형광을 기준으로 식세포작용 활동 계산했습니다. 세 번의 반복실험이 수행되었습니다. 

 


 

4. ioMicroglia form co-cultures with ioGlutamatergic Neurons

ioGlutamatergic 뉴런을 해동 후 10일째까지 배양했습니다. 해동 후 1일 또는 10일째에 배양된 ioMicroglia를 10일째 ioGlutamatergic 뉴런에 직접 첨가했습니다. co-culture는 추가로 8일 동안 유지되었습니다. 이미징은 30분 간격으로 수행되었습니다. ioMicroglia가 ioGlutamatergic Neurons와 안정적인 공동 배양을 형성한다는 것을 보여주는 대표적인 비디오입니다. 

  

 

 

5. ioMicroglia retain phagocytic function in co-culture with ioGlutamatergic Neurons

ioGlutamatergic 뉴런과 공동 배양하여 pHrodo™ Red 라벨이 붙은 Zymosan 입자를 선택적으로 식균하는 ioMicroglia를 보여주는 대표적인 비디오니다. ioMicroglia는 pH 변화에 의해 시작되는 물질을 삼켰을 때 빨간색으로 형광을 발하기 시작합니다.

 


 

 

Opti-ox 기술이란? 

 

Opti-ox는  Optimized inducible overexpression Tet system을 이용하여 특정 transcriptional factor 발현을 유도하는 시스템입니다. 

         - Opti-ox는 Dual targeting cassette로 구성되어 있습니다. 

         - cassette(1)은 Dox (doxycyclin)에 의해 조절되는 transcriptional activator protein 유전자를 삽입하고

         - cassette(2)는 (1)에 의해 조절되는 transcription factor를 삽입합니다. 

         - 즉, Dox양에 의해 transcriptional activator protein 발현이 유도되고, 이에 의해 특정 transcription factor의 발현이 조절되어 원하는 cell 타입으로 리프로그래밍을 유도할 수 있습니다.  

 

Opti-ox로 분화된 세포는 

         1) Lot to Lot variation이 없습니다.

         2) Scale up production이 가능합니다.

         3) 세포 안정화 후 바로 실험이 가능하므로 실험시간을 단축시킬 수 있습니다.



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