Tyramide Signal Amplification | TSA Vivid Fluorophore Kits | 고마바이오텍

Tyramide Signal Amplification (TSA)이란?  

Tyramide Signal Amplification (TSA)는 catalyzed reporter deposition (CARD)라고도 하며, IHC, ICC와 FISH에서 농도가 낮은 타겟에 대한 신호 측정을 효율적으로 향상시킵니다. 

2차 항체의 HRP는 H₂O₂하에서 비활성 Tyramide (inactive tyramide)를 활성 Tyramide로 촉매하고, 형광 혹은 합텐으로 라벨링된 활성화된 Tyramide는 인접한 tyrosine 잔기에 결합을 유도함으로써 라벨링 면적을 확장시킵니다.  

TSA는 peroxidase quenching buffer를 사용하여 HRP를 비활성화 한 다음, 다른 종 host로 부터 유래한 다른 항체 세트를 사용하여 하나의 샘플에서 여러 표적의 신호를 향상시킬 수 있습니다. 또는 TSA의 초기 라운드에 대한 항체를 제거한 후 공유 결합된 Tyramide를 이용하여 TSA를 반복할 수 있습니다.

Figure 1. Tyramide Signal Amplification 원리  : 1차 및 2차 항체는 타겟 부위에 반응합니다. 2차 항체에 라벨링되어 있는 HRP는 H₂O₂ 하에서 비활성 Tyramide를 활성 Tyramide로 촉매하여 근접한 단백질의 tyrosine 잔기에 공유적으로 결합하도록 유도하여 신호를 증폭합니다.

Tyramide 신호 증폭의 특징

• 저농도의 표적을 탐지할 수 있습니다. 
• IHC, ICC 및 ISH에서 신호를 강화하는 데 사용됩니다.
• 1차 항체의 사용량을 줄일 수 있습니다. 
• 기존 방법보다 100배 더 민감합니다.
• 형광 멀티플렉스 염색 가능합니다. 
  

TSA Vivid Fluorophore Kits

• TSA Vivid Fluorophore는 ICC, IHC와 FISH 실험시, 밝기를 높이고 성능을 개선하도록 설계되었습니다. 
• TSA Vivid Fluorophore Kit는 Multiplex에 적합하며, 동등한 경쟁 제품보다 더 밝습니다.
• Kit의 구성 : TSA Vivid Fluorophore + DMSO (for reconstitution)

Figure 2. HeLa 세포에서 3-plex RNAScope™ Multiplex Fluorescent v2 Assay 수행한 결과입니다. 경쟁 염료(왼쪽)와 TSA vivid dyes (오른쪽)를 각각 520, 570, 650을 사용한 것입니다. 모든 염료는 1:1500으로 희석되었습니다. Polr2a 마커는 초록색으로 PPIB는 빨간색으로 UBC는 흰색으로 표시되었습니다. 핵은 DAPI(Cat. No. 5748)로 counter-stain하였습니다. 

Figure 3. 인간 폐암 조직에 경쟁 염료(왼쪽)와 TSA Vivid dyes(오른쪽을) 각각 520, 570, 650으로 3-plex RNAScope™ Multiplex Fluorescent v2 Assay하였습니다. 모든 염료는 1:1500으로 희석되었습니다. 암 면역종양마커가 IDO-1은 초록색으로, KRT-19는 빨간색으로, PD-1은 흰색으로 조사되었습니다. 핵은 DAPI(Cat. No. 5748)로 counter-stain되었습니다. 

IHC와 ICC를 위한 TSA 프로토콜

1. IHC와 ICC의 프로토콜에 따라 세포와 조직 샘플의 고정, ​투과, blocking을 수행합니다. 
2.  1차 항체를 처리합니다.
   
3. HRP가 라벨링된 2차 항체를 처리합니다.
   
4. TSA Vivid Fluorophore를 100ul DMSO에 녹인 후 슬라이드에 처리합니다.
   
5. 형광 강도를 측정합니다. 필요에 따라 TSA 단계를 반복하여 모든 표적에 라벨링 합니다.