Tyramide Signal Amplification | TSA Vivid Fluorophore Kits | 고마바이오텍

Tyramide Signal Amplification (TSA)이란?  

Tyramide Signal Amplification (TSA)는 catalyzed reporter deposition (CARD)라고도 하며, IHC, ICC와 FISH의 저농도 표적에 대한 신호와 탐지 기능을 효율적으로 향상시키는 효과적인 방법을 제공합니다. (Figure 1 참고) Tyramide 시약은 형광 검출용 염료(Fluorescent dye) 또는 항체 기반 조사용 합텐(hapten for antibody-based probing)과 결합될 수 있습니다. 

HRP는 (형광 염료 또는 합텐 등으로) 표지된 비활성 Tyramide (inactive tyramide)가 반응성 라디칼로 전환하도록 촉매하고, 반응성 라디칼로 전환되어 활성형이 된 Tyramide는 인접한 tyrosine 잔기에 결합하여 표지 밀도를 크게 증가 시킵니다. 

TSA는 peroxidase quenching buffer를 사용하여 HRP를 비활성화하여 하나의 샘플에서 여러 표적의 신호를 향상시키는 데 사용할 수 있고, 그 후 다른 숙주 종의 다른 항체 세트를 사용하여 TSA의 또 다른 라운드를 수행할 수 있습니다. 또는 TSA의 초기 라운드에 대한 항체를 제거하여 공유 결합된 Tyramide를 남길 수 있습니다. 그 후, 원하는 수의 대상에 대해 TSA를 반복할 수 있습니다.

Figure 1. Tyramide Signal Amplification 원리  : 1차 항체와 2차 항체는 조직이나 세포 샘플을 표지하기 위해 사용됩니다. 2차 항체는 HRP에 사전 접합되어 있으며, 이는 H2O2가 존재할 때, 표지된 tyramide 기질을 항체와 HRP에 매우 근접한 단백질의 tyrosine 잔기에 공유적으로 결합하는 반응성이 높은 종으로 촉매하여 신호 증폭을 제공합니다.

Tyramide 신호 증폭의 특징

• 저농도의 표적을 탐지합니다.
• IHC, ICC 및 ISH에서 신호를 강화하는 데 사용됩니다.
• 1차 항체의 사용량을 줄일 수 있습니다. 
• 기존 방법보다 100배 더 민감합니다.
• 형광 멀티플렉스 시스템과 호환 가능합니다.
  

TSA Vivid Fluorophore Kits

• TSA Vivid Fluorophore는 ICC, IHC와 FISH를 적용할 때 밝기를 높이고 성능을 개선하도록 설계되었습니다. 
• TSA Vivid Fluorophore Kit는 Multiplex에 적합하며, 동등한 경쟁 제품보다 더 밝습니다.
• Kit의 구성 : TSA Vivid Fluorophore + DMSO, for reconstitution

Figure 2. HeLa 세포에서 3-plex RNAScope™ Multiplex Fluorescent v2 Assay 수행한 결과입니다. 경쟁 염료(왼쪽)와 TSA vivid dyes (오른쪽)를 각각 520, 570, 650을 사용한 것입니다. 모든 염료는 1:1500으로 희석되었습니다. Polr2a 마커는 초록색으로 PPIB는 빨간색으로 UBC는 흰색으로 표시되었습니다. 핵은 DAPI(Cat. No. 5748)로 counter-stain하였습니다. 

Figure 3. 인간 폐암 조직에 경쟁 염료(왼쪽)와 TSA Vivid dyes(오른쪽을) 각각 520, 570, 650으로 3-plex RNAScope™ Multiplex Fluorescent v2 Assay하였습니다. 모든 염료는 1:1500으로 희석되었습니다. 암 면역종양마커가 IDO-1은 초록색으로, KRT-19는 빨간색으로, PD-1은 흰색으로 조사되었습니다. 핵은 DAPI(Cat. No. 5748)로 counter-stain되었습니다. 

IHC와 ICC를 위한 TSA 프로토콜

1. 세포와 조직 샘플의 고정, ​투과, 차단을 위해 IHC와 ICC의 프로토콜을 따릅니다.
2.  1차 항체와 배양합니다.
   
3. HRP 결합 이차 항체와 배양합니다.
   
4. 염료 티라미드 용액(예: Cyanine 3 Tyramide (Cat. No. 6457)) 과 함께 배양합니다.
   
5. 형광 강도를 시각화 및/또는 기록하거나 필요에 따라 TSA 단계를 반복하여 모든 표적에 라벨링을 합니다. (HRP를 퀜칭하거나 항체를 제거한 후)