리포푸신/자가형광 제거 | TrueBlack Lipofuscin Autofluorescence Quenchers

시약 및 기기 상세

리포푸신/자가형광 제거 | TrueBlack Lipofuscin Autofluorescence Quenchers

Maker : BIOTIUM

TrueBlack Lipofuscin Autofluorescence Quencher는 면역형광염색시 조직 절편에서 Lipofuscin 자가형광을 억제하고 세포외 기질과 같은 다른 소스로부터의 자가형광을 줄이는 데도 도움이 될 수 있습니다.

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특징

리포푸신(Lipofuscin)은 노화된 세포의 리소좀에 쌓이는 산화된 단백질과 지질의 결정체입니다. 모든 형광 채널에서 매우 밝게 빛나기 때문에, 인간이나 노화된 동물의 뇌, 망막 조직 등을 촬영할 때 실제 항체 신호를 구분하기 어렵게 만듭니다.

TrueBlack®은 조직 섹션 내의 리포푸신 자가형광을 억제(Quench)하여, 면역형광염색 시 실제 신호를 명확하게 볼 수 있게 해주는 혁신적인 시약입니다.

완벽한 노이즈 제거: 리포푸신으로 인한 자가형광을 제거하여 인간 및 노령 동물의 조직 이미징을 가능하게 합니다.
낮은 배경 노이즈: 기존에 사용하던 'Sudan Black B'라는 시약은 자가형광은 막아주지만, 정작 본인이 적색(Red) 및 원적색(Far-red) 채널에서 배경 노이즈를 발생시키는 단점이 있었습니다. TrueBlack®은 이 문제가 거의 없습니다.
유연한 워크플로우: 면역형광염색 전 또는 후 아무 때나 사용할 수 있습니다.
빠르고 간단함: 실험 과정이 단순하며, 항체 신호나 핵 염색(DAPI 등)에 미치는 영향이 최소화되어 신호 대 잡음비(S/N ratio)를 잘 보존합니다.
기타 노이즈 감소: 리포푸신 외에도 콜라겐, 엘라스틴, 적혈구 등에서 발생하는 일반적인 자가형광을 줄이는 데도 도움을 줍니다.

주요 제품

Original TrueBlack®: DMF(20X) 또는 DMSO(30X)에 녹아 있는 형태입니다. DMSO 버전이 독성이 더 낮습니다.
TrueBlack® Plus: 차세대 제품으로, 기존 제품보다 원적색(Far-red) 배경 노이즈를 더 낮췄습니다. 특히 수용성 버퍼(Aqueous buffer)를 사용할 수 있어, 두꺼운 조직 샘플을 오래 담가두어도 조직이 수축되지 않는다는 큰 장점이 있습니다.

비교 항목	TrueBlack® Lipofuscin Autofluorescence Quencher (Original)	TrueBlack® Plus Lipofuscin Autofluorescence Quencher, 40X in DMSO (Next-Gen)
카탈로그 번호	#23007 (TrueBlack®, 20X in DMF) #23011 (TrueBlack®, 30X in DMSO)	#23014 (TrueBlack® Plus, 40X in DMSO)
주요 용매 (Solvent)	70% 에탄올 (EtOH) 기반	수용성 버퍼 (PBS/물) 기반
원적색 배경 노이즈(Far-red Background)	낮음 (Sudan Black B보다는 훨씬 낮음)	매우 낮음 (가장 낮은 수준)
조직 수축 위험	있음 (고농도 에탄올 사용 시)	없음 (수용성 버퍼 사용으로 안전)
두꺼운 조직 샘플	장시간 처리 시 조직 손상 우려	장시간 인큐베이션에 매우 적합
염색 호환성	일부 에탄올 민감성 염료와 충돌 가능	모든 염색 및 소수성 염료와 호환성 우수
마운팅 미디어 권장	EverBrite™ 등	EverBrite™ (글리세롤 기반 권장)

* 일반적인 얇은 슬라이드 샘플이라면 TrueBlack® Original로도 충분히 훌륭한 결과를 얻을 수 있지만, 조직의 원형 보존이 중요하거나 두꺼운 샘플, 혹은 원적색 채널을 정밀하게 분석해야 하는 경우라면 TrueBlack® Plus를 선택하는 것이 훨씬 유리합니다.

실험 데이터

TrueBlack®-quenches-lipofuscin-with-less-background-than-Sudan-Black-B

TrueBlack®은 Sudan Black B보다 Background를 적게 발생시키면서 리포푸신을 억제(Quench)합니다.

아무것도 처리하지 않은 조직(맨 위 줄)에서 리포푸신은 모든 형광 채널에서 빛을 내는 형광 입자(Granules)로 나타났습니다. Sudan Black B(가운데 줄)는 리포푸신의 자가형광을 차단(Mask)해 주었지만, 대신 적색(Red) 및 원적색(Far-red) 채널에서 자체적인 배경 노이즈를 발생시켰습니다. TrueBlack®(맨 아래 줄)은 형광 배경 노이즈를 거의 증가시키지 않으면서 리포푸신을 성공적으로 차단했습니다.

TrueBlack®-treatment-can-be-performed-before-or-after-immunofluorescence-staining

TrueBlack 전처리는 특정 염색(Specific staining)에는 거의 영향을 미치지 않으면서 리포푸신 자가형광을 제거했습니다(B).

면역형광염색 전 TrueBlack® 전처리를 이용한 리포푸신 자가형광의 억제(Quenching)를 보여줍니다.

포름알데히드로 고정된 인간 대뇌 피질 동결 절편을 아무것도 처리하지 않거나(A), TrueBlack®으로 처리한 후(B), CF®488A가 결합된 anti-NeuN 항체(녹색)와 DAPI(청색)로 염색했습니다. 절편들은 Zeiss LSM700 공초점 현미경을 사용하여 모든 채널에서 촬영되었습니다.

Sudan Black, TrueBlack Original 및 TrueBlack Plus의 비교

별도의 억제 처리(Quenching treatment)를 하지 않은 메탄올 고정 인간 대뇌 피질 동결 절편의 리포푸신 자가형광은 모든 채널에서 빛을 내는 밝은 점 형태(Punctate spots)로 나타나며, 병합된 이미지(Merged image)에서는 분홍색으로 보입니다. Sudan Black B를 이용한 전통적인 처리 방식은 높은 수준의 원적색(Far-red) 배경 형광을 유발합니다. 오리지널 TrueBlack® 처리는 리포푸신 자가형광을 제거하지만, 여전히 낮은 수준의 적색/원적색 형광을 발생시킵니다. 반면, TrueBlack® Plus는 70% 에탄올 대신 PBS에서 사용할 수 있으며, 리포푸신 자가형광을 억제하면서도 가장 낮은 수준의 원적색 배경 노이즈를 보여줍니다.

주문정보

주문정보 - Cat No, PRODUCT, SIZE, 수량 등 항목으로 구성되어있습니다.
Product	Cat.No.	Size	Maker
TrueBlack® Lipofuscin Autofluorescence Quencher, 30X in DMSO	23011	1 mL	BIOTIUM
TrueBlack® Lipofuscin Autofluorescence Quencher, 20X in DMF	23007	1 ml	BIOTIUM
TrueBlack® Plus Lipofuscin Autofluorescence Quencher, 40X in DMSO	23014	500 ul	BIOTIUM
TrueBlack® Plus Lipofuscin Autofluorescence Quencher, 40X in DMSO (trial size)	23014-T	50 ul	BIOTIUM

1
Maker	BIOTIUM
Cat.No.	23011
Product	TrueBlack® Lipofuscin Autofluorescence Quencher, 30X in DMSO
Size	1 mL
Qty
Data Sheet
MSDS

2
Maker	BIOTIUM
Cat.No.	23007
Product	TrueBlack® Lipofuscin Autofluorescence Quencher, 20X in DMF
Size	1 ml
Qty
Data Sheet
MSDS

3
Maker	BIOTIUM
Cat.No.	23014
Product	TrueBlack® Plus Lipofuscin Autofluorescence Quencher, 40X in DMSO
Size	500 ul
Qty
Data Sheet
MSDS

4
Maker	BIOTIUM
Cat.No.	23014-T
Product	TrueBlack® Plus Lipofuscin Autofluorescence Quencher, 40X in DMSO (trial size)
Size	50 ul
Qty
Data Sheet
MSDS