퇴화뉴런 염색 | PathoGreen™ Histofluorescent Stain | 고마바이오텍

• Fluoro-Jade® dyes와 기능적으로 유사한 음이온성의 녹색 형광 dye입니다.
• 뇌의 절편 혹은 배양시킨 뉴런에서 다양한 신경독성을 발현하는 퇴화한 뉴런만을 염색합니다.
• 죽어가는 뉴런에서 음이온성의 dye가 양이온의 Polyamine 혹은 다른 분자들과 특이적으로 결합하게 되며, 이를 이용하여 퇴화한 뉴런만을 검출하게 됩니다.

사양

• Apo​ptosis/viability marker : Dead cell stain
• 세포 유형 : 고정 세포/조직 절편 (vibratome section/frozen section/paraffin section 모두 가능)
• 감지 및 판독 : 형광 현미경
• 어세이 타입 : Endpoint assay
• 색상 : 녹색
• Excitation/Emission wavelength: 497/520 nm

사용방법 

1. 비브라톰 절편은 젤라틴 코팅된 슬라이드에 마운팅한 뒤 최소 30분간 50=60oC로 슬라이드 워머에서 건조시켜줍니다. 얼린 절편은 상온에서 슬라이드를 데워줍니다. 파라핀 절편은 탈파라핀화를 하고 물에서 다시 수화한 뒤, 5번 과정을 진행합니다.

2. 상온으로 5분간 염기성 알콜(20 mL 1% NaOH (w/v in water) + 80 mL absolute ethanol)에서 절편을 고정합니다.

3. 2분간 70% 에탄올에서 슬라이드를 배양합니다.

4. 2분간dH20에서 슬라이드를 배양합니다.

5. 10분간 0.06% 과망간산 칼륨이 들어있는 dH20에서 슬라이드를 배양합니다. 

6. dH20에서 두차례 슬라이드를 헹군 뒤, 2분간 dH20에서 배양합니다.

7. 1000X PathoGreen스톡을 0.1% acetic acid가 있는 dH20에서 1:1000 비율로 희석하여 1X PathoGreen 염색 용액을 준비합니다.

8. 10분간 1X Pathogreen 염색 용액에서 슬라이드를 배양합니다.

9. dH20에서 1분씩 세차례 슬라이드를 헹굽니다.

10. 최소 5분 동안 슬라이드 워머에서 50-60도로 자연 건조합니다.

11. 1-5분 동안 xylene에서 슬라이드를 배양합니다.

12. DPX mounting media에서 슬라이드를 커버슬립으로 덮습니다.

13. fluorescin filter set을 이용하여 형광 이미징을 합니다.

생쥐 해마 절편 내 퇴화중인 뉴런의 PathoGreen™ Histofluorescent 염색