KILR Cytotoxicity Assay Cell line | KILR Effector Cells | 고마바이오텍

특징

• KILR (Killing-mediated Immune Lysis Reaction) cytotoxicity assay는 표적 세포 사멸을 구체적으로 측정할 수 있는 방법으로 방사성동위원소를 사용하지 않아 편리하고 안전합니다. 
  
• KILR 분석은 항체의존 세포 매개 세포독성, ADCC, 보체의존 세포독성 (CDC), 항체의존 세포 식균작용 (ADCP), 세포 독성 T 세포를 통한 표적 세포 사멸 측정을 포함한 암면역요법 (Cancer Immunotherapy, iOnc) 약물개발, 이중특이성 항체 매개 T Cell redirection, CAR-T, adoptive T cell therapy등 다양한 면역을 이용한 약물 실험에 적용할 수 있습니다.
  
• 스크리닝, 특성화, 면역요법 약물에 대한 QC lot release assay등 drug discovery 전 과정에 이용될 수 있습니다. 
• KILR assay target clone cell line 및 cell pool은 최소 15회 계대배양동안 안정합니다. 
• KILR 세포주는 강화된 Prolabel(ePL)로 tagging된 housekeeping gene을 발현하도록 조작된 cancer cell line 입니다.
• KILR 세포가 용해되면 ePL-tagged protein이 배지로 방출되고, 여기에 효소 수용체(EA)를 추가함으로써 β-galactosidase fragments인 EA와 ePL의 complementation을 유도합니다. 
• 생성된 β-galactosidase는 기질을 가수분해하여 화학발광 신호를 생성합니다.

적용

• Antibody Dependent Cell-mediated Cytotoxicity (ADCC)
• Complement Dependent Cytotoxicity (CDC)
• Antibody Dependent Cellular Phagocytosis (ADCP)
• Bi-specific Antibody Mediated T-cell Redirection
• Chimeric Antigen Receptor T-Cell (CAR-T)
• Adoptive T-cell Therapies

원리 

receptor antigen을 발현하는 target cell은 KILR Retroparticle을 사용하는 β-galactosidase reporter 단편인 enhanced ProLabel® (ePL)로 tag된 housekeeping protein을 안정적으로 발현하도록 고안되었습니다.

안정한 target cell line이 cytotoxicity 분석에 사용되고, 세포 사멸로 인해 막이 손상되면 tagged protein이 배지로 방출됩니다. b-gal reporter의 효소 수용체 (EA)가 포함된 검출 시약을 추가하여 배지에서 이 KILR reporter 단백질을 검출합니다. 

실험 과정

종류  

KILR CD16 Effector Cells

• 안정적으로 CD16을 발현하도록 엔지니어링된 human primary effector cell
• single donor로부터 유래되어 가변성 제거
• 바로 사용할 수 있는 동결 세포
• lot간 높은 재현성으로 장기적인 QC 테스트에 적합 
• 세포사멸 측정 - ADCC와 TCR의 생물학적 연관성 측정  

Cell Pools and Starter Packs

• ​Tumor 환경의 단백질을 발현하도록 엔지니어링된 cell line 
• effector cell에 의해 세포 사멸 발생시 ProLabel이 media로 유리됨 
  
• KILR cell pool의 % lysis를 계산하여 세포사멸 측정

Detection Kit  

• Cytotoxicity를 위한 reagent kit 
• KILR cell line이 lysis될 때 유리되는 ProLabel과 반응하는 EA 제공. 두 component가 결합하여 β-galactosidase를 형성하게 되면 기질에 의해 발광됨
• 구성 : 96-Well Plate, KILR Detection Reagent 1, 2, 3, KILR Total Lysis Control