[FAQ] TUNEL Assay란 무엇인가요? | 고마바이오텍

1. TUNEL Assay란 무엇인가요?

TUNEL 분석법은 세포사멸 세포를 표지하고 검출하는 방법입니다. 세포사멸 세포에 존재하는 DNA 단편은 terminal deoxynucleotidyl transferase (TdT)-mediated dUTP nick end labeling (TUNEL) 방법으로 검출할 수 있습니다. TUNEL 분석은 세포사멸과 괴사 세포의 특징인 DNA 단편화를 식별합니다.

2. TUNEL 분석에서 괴사 세포와 세포사멸 세포를 어떻게 구별할 수 있나요?

괴사 세포와 세포사멸 세포를 구별하기 위해 추가적인 세포사멸 검출 방법을 사용할 수 있습니다. TUNEL 염색 외에도 세포 내 활성 caspase의 면역 반응성은 세포가 괴사성인지 세포사멸인지를 나타낼 수 있습니다. 다음 프로토콜은 이러한 유형의 이중 표지를 사용한 세포사멸 검출 응용 프로그램을 보여줍니다.

https://www.rndsystems.com/resources/protocols/technical-notes-detection-apoptosis-double-labeling-tunel-and-active-caspase-3 

3. Apoptosis Staining Kit에서 세포질이 광범위하게 염색되어 보이는 이유는 왜 그런가요? 

광범위한 세포질 염색은 세포 사망/늦은 세포 사멸 또는 괴사가 진행되었음을 말합니다. 이를 방지하려면 세포 배양에서 샘플 처리 시간을 줄여야 합니다. 이는 세포 배양에서 세포 사멸이 충분한 시간이 주어지면 괴사로 진행될 수 있기 때문입니다. 

4. 어떤 종류의 TUNEL kit가 제공되나요?

관찰하고자 하는 샘플타입과 분석 방법에 따라 IHC법, 유세포법, Microplate reader 법 등의 다양한 킷트로 제공됩니다. 또한, 심장, 피부, 신경, 종양, 혈관 세포 및 조직을 포함한 특정 조직 유형에 최적화된 apoptosis kit을 제공합니다. (자세히 보기) 

5. TACS® Blue Label이 녹색으로 보이는 이유는 무엇인가요?

녹색으로 보이는 것은 산화(표백제, 금속 및 기타 산화제 존재) 때문입니다. TACS® Blue Label 단계 전과 후에 deionized water로 세척해야 합니다. 작업대, 피펫, 팁 등이 표백제나 기타 강력한 산화제로 오염되지 않았는지 확인해 보세요. 혹은 Methyl Green이 TACS® Blue Label로 오인되었을 수 있습니다. Methyl Green은 에탄올 세척 전에는 파랗게 보일 수 있으며 과도한 염료가 씻겨 나가면서 녹색으로 바뀝니다.

6. TACS® Blue Label이 퇴색하는 이유는 무엇인가요?

TACS® Blue Label이 염색 후 퇴색하는 데에는 여러 가지 이유가 있을 수 있습니다. 수돗물의 염소는 블루 라벨을 용해하므로 탈이온수를 사용하는 것이 필수적입니다. 알코올 계열(에탄올 또는 변성 에탄올만)과 o- 또는 p-크실렌만(혼합 크실렌은 불가)을 줄여서 적절한 탈수를 보장합니다. 용액을 자주 교체해야 합니다. 올바른 장착 매체를 사용합니다. 퇴색은 벤젠 용해성 때문일 수도 있습니다. 벤젠 오염 물질은 일부 혼합 크실렌에서 발견됩니다. 탈수 후 투명화하려면 o- 또는 p-크실렌을 사용합니다. 장착 매체를 혼합 크실렌으로 희석하지 마십시오. 최적의 염색을 유지하려면 슬라이드를 어두운 곳에 보관해야 합니다. 

TUNEL Assay Kit 보러가기