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엔도톡신 제거 | Endotoxin Removal Spin Column Kit 이미지

엔도톡신 제거 | Endotoxin Removal Spin Column Kit

Maker : PROTEIN ARK

Proteus NoEndo Kit는 단백질 정제 후 남은 독소(Endotoxin)를 빠르고 간편하게 제거하여 생물학적 안전성을 확보하는 데 특화된 제품입니다.

특징

 

  • 엔도톡신 수치를 최소 0.03 EU/ml 수준까지 낮출 수 있습니다.
  • 독소만 선택적으로 제거하므로 타겟 단백질은 95% 이상 높은 비율로 회수(Recovery)됩니다.
  • SelfSeal™ 멤브레인 기술은 샘플이 새지 않으면서도 높은 포집 효율과 재현성을 보장합니다.
  • 기존의 복잡하고 지루한 크로마토그래피 단계를 생략하고, 신속하게 독소를 제거할 수 있도록 최적화되었습니다.
  • 컬럼 준비에 걸리는 시간을 최소화하여 즉각적인 실험이 가능합니다.
  • 여러 샘플을 동시에 처리할 수 있어, 빠른 스크리닝이나 실험 조건 개발(Method development)에 매우 유리합니다.
  • 다양한 종류의 단클론 항체(mAbs)와 일반 단백질 모두에 적용 가능한 표준 프로토콜을 제공합니다.
  • Binding capacity에 따라 NoEndo μ (micro), NoEndo M (mini), NoEndo S (standard), NoEndo HC (high capacity)로 구분됩니다.

 

 

원리 

 

화학적 원리

엔도톡신은 박테리아 세포벽의 일부인 지질다당류(LPS)로, 강한 음전하와 소수성(기름과 친한 성질) 부위를 동시에 가지고 있습니다. NoEndo 컬럼 내부 레진에는 엔도톡신과 매우 강력하게 결합하는 특수 리간드가 코팅되어 있습니다. 단백질 용액이 레진을 통과할 때, 엔도톡신은 자석처럼 레진에 달라붙고, 타겟 단백질은 상호작용 없이 그대로 통과하게 됩니다. 이 원리를 통해 95% 이상의 단백질은 그대로 회수하면서 엔도톡신 농도만 0.03 EU/ml 이하로 극적으로 낮출 수 있습니다.

 

물리적 원리

일반 스핀 컬럼과 차별화되는 가장 큰 특징은 컬럼 하단에 위치한 SelfSeal™ 멤브레인입니다.

일반 컬럼은 액체를 넣으면 바로 아래로 빠져나가지만, NoEndo 컬럼은 원심분리 전에는 멤브레인이 닫혀 있습니다. 덕분에 샘플과 레진이 컬럼 안에서 충분히 섞일 수 있는 시간(Batch mode)을 확보해주며, 이는 엔도톡신 포집 효율을 극대화합니다. 원심분리기를 돌려 일정한 힘(G-force)이 가해지면 멤브레인의 기공이 열립니다. 이때 엔도톡신이 제거된 깨끗한 단백질만 아래 튜브로 용출되고, 엔도톡신이 붙은 레진 입자는 상단에 그대로 남게 됩니다.



작동 과정

1. Loading: 엔도톡신이 포함된 단백질 샘플을 컬럼에 넣습니다.

2. Incubation: 멤브레인이 막아주는 동안 샘플과 레진을 섞어 엔도톡신이 레진에 붙게 합니다.

3. Centrifugation: 원심분리를 통해 멤브레인을 열고 엔도톡신이 제거된 순수 단백질만 회수합니다.

 


종류

  NoEndo μ (Micro) NoEndo M NoEndo S NoEndo HC
Cat. No.  GEN-NoE2Micro
GEN-NoE24Micro
GEN-NoE100Micro
GEN-NoE2M
GEN-NoE12M
GEN-NoE48M
GEN-NoE2S
GEN-NoE12S
GEN-NoE48S
GEN-NoE2HC
GEN-NoE12HC
GEN-NoE48HC
Typical in situ binding capacity per column 300-500 EU 3000 EU 30,000 EU 500,000-1,000,000 EU
Typical endotoxin binding capacity per ml 500-800 EU/ml 300 EU/ml 1,500 EU/ml 30,000 EU/ml
Minimum endotoxin levels tested post-column <0.03 EU/ml <0.03 EU/ml <0.05 EU/ml <0.05 EU/ml
Typical endotoxin clearance after 1 pass - - 3 log reduction 3 log reduction
Typical endotoxin clearance after 2 passes - - 4 log reduction 4 log reduction
Typical endotoxin clearance after 1 hour incubation 3 log reduction 2 log reduction - -
Typical endotoxin clearance after 3 hour incubation 4 log reduction 3 log reduction - -
Maximum sample load volume 0.6 ml 20 ml 20 ml 20 ml
Bead volume 0.01-0.1 ml loose 0.25 ml loose 1 ml pre-packed 1.7 ml pre-packed
Resin NoEndo™ resin NoEndo™ resin NoEndo™ resin NoEndo™ resin
Bead size range 100 μm 100 μm 100 μm 100 μm
Proteus matrix Cross-linked 6 % agarose Cross-linked 6 % agarose Cross-linked 6 % agarose Cross-linked 6 % agarose
Recommended working pH 4-8 4-8 4-8 4-8
Color coded end-caps supplied in vials supplied in vials Light green Dark green


적용



  

 

Performance

  

 

Figure 1: TheProteus NoEndo™ HC spin columns effectively remove endotoxin from BSA and rabbit IgG samples (1mg/ml) spiked with E.coli lysate. The Proteus NoEndo™ HC spin columns were pre-equilibrated with PBS (pH 7.5) and 20 ml protein samples were loaded and centrifuged at 100 g for 30 min. The flow throughs were loaded on to second columns and centrifuged using the same conditions.

Endotoxin data was generated using the kinetic chromogenic LAL assay (Charles River Endosafe plate reader). Typically, a 4 log reduction in endotoxin was observed. The protein recoveries were determined separately with the Proteus NoEndo™ HC spin columns.

 

 

 

Figure 2: The Proteus NoEndo™ M spin columns effectively removes endotoxin from BSA and rabbit IgG samples (1mg/ml) spiked with E.coli lysate. The Proteus NoEndo™ M spin columns were loaded with 0.25 ml NoEndo™ resin and washed at 500 g for 5 min to remove the resin storage buffer. The column resins were then washed with 15 ml equilibration buffer twice. 20 ml protein sample was batch incubated with the washed resin for up to 3 hours on a standard tube roller. The columns were centrifuged at 700 g for 10 min. Endotoxin data was generated using the kinetic chromogenic LAL assay (Charles River Endosafe plate reader). Typically, 3 log reductions in endotoxin were observed. 

 

주문정보

주문정보 - Cat No, PRODUCT, SIZE, 수량 등 항목으로 구성되어있습니다.
  Product Cat.No. Size Maker Qty Data Sheet MSDS
Proteus NoEndo Micro 100-Column Kit GEN-NoE100Micro 1 kit PROTEIN ARK
Proteus NoEndo Micro 2-Column Kit GEN-NoE2Micro 1 kit PROTEIN ARK
Proteus NoEndo Micro 24-Column Kit GEN-NoE24Micro 1 kit PROTEIN ARK
Proteus NoEndoHC 12-Column Kit GEN-NoE12HC 1 kit PROTEIN ARK
Proteus NoEndoHC 2-Column Kit GEN-NoE2HC 1 kit PROTEIN ARK
Proteus NoEndoHC 48-Column Kit GEN-NoE48HC 1 kit PROTEIN ARK
Proteus NoEndoM 12-Column Kit GEN-NoE12M 1 kit PROTEIN ARK
Proteus NoEndoM 2-Column Kit GEN-NoE2M 1 kit PROTEIN ARK
Proteus NoEndoM 48-Column Kit GEN-NoE48M 1 kit PROTEIN ARK
Proteus NoEndoS 12-Column Kit GEN-NoE12S 1 kit PROTEIN ARK
Proteus NoEndoS 2-Column Kit GEN-NoE2S 1 kit PROTEIN ARK
Proteus NoEndoS 48-Column Kit GEN-NoE48S 1 kit PROTEIN ARK
100 ml NoEndo Resin (1 x 100 ml; 50% slurry) GEN-NoE100ml 100 ml PROTEIN ARK
25 ml NoEndo Resin (1 x 25 ml; 50% slurry) GEN-NoE025ml 25 ml PROTEIN ARK
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