특징
- Y-27632 dihydrochloride는 세포 생물학 연구에서 매우 광범위하게 사용되는 선택적 ROCK(Rho-associated protein kinase) 억제제입니다.
- ROCK1(p160 ROCK)과 ROCK2를 강력하게 억제하며, PKA, PKC, MLCK 등 다른 키나아제 대비 선택성이 매우 높습니다.
- PRK2를 저농도(IC50 = 600 nM)에서 억제합니다.
- 세포막 투과성이 우수하고, 경구 투여가 가능하며 체내에서도 활성을 나타냅니다.
- 줄기세포 연구에서는 hES(인간 배아줄기세포) 및 iPSC(유도만능줄기세포)의 동결 보존시 세포 생존율을 크게 높입니다.
- CHIR 99021 등 여러 시약과 조합하여 섬유아세포를 성숙한 신경세포로 재프로그래밍하는 데 사용됩니다.
- Primed ESC/iPSC에서 Naive 인간 줄기세포를 유도할 때, 배양 배지(NHSM)에 포함되어 세포 성장과 생존력을 최적화합니다.
- 다양한 오가노이드 배양에 이용됩니다.
사양
| M. Wt |
320.26 |
| Formula |
C14H21N3O.2HCl |
| Storage |
Desiccate at RT |
| Purity |
≥98% (HPLC) |
| CAS Number |
129830-38-2 |
| PubChem ID |
14801906 |
| InChI Key |
VJGZNBYDSDEOED-FJSYBICCSA-N |
| Smiles |
N[C@H](C)[C@@]1([H])CC[C@H]([C@](NC2=CC=NC=C2)=O)CC1.Cl.Cl |
용해도
| Solubility |
Solvent |
Max Conc.
mg/mL |
Max Conc. mM |
| DMSO |
32.03 |
100 |
| water |
32.03 |
100 |
실험 데이터
그림 1. MESP1+ 중배엽 세포에서의 Y-27632 dihydrochloride 적용.
Y-27632(1 μM)에 의한 ROCK 억제는 MESP1+ 중배엽의 골격근 분화를 촉진합니다. 이는 Myosin Heavy Chain(녹색)과 Myogenin(적색)에 대한 면역염색과 DAPI(Tocris #5748; 청색)를 이용한 대조염색을 통해 확인할 수 있습니다. 데이터 제공: 미네소타 대학교 Sunny Chan 박사 및 Michael Kyba 박사.
그림 2. iPSC 유래 뇌 오가노이드의 배양 및 특성 분석에 있어서 Y-27632 dihydrochloride의 적용.
iPSC에서 유래한 뇌 오가노이드(45일 차)를 Cultrex UltiMatrix RGF Basement Membrane Extract(#BME001-05)와 뇌 오가노이드 배양 배지를 사용하여 배양하였으며, 이 배지에는 뇌 오가노이드 배양법에 명시된 다른 시약들과 함께 Y-27632 dihydrochloride가 포함되어 있습니다. 대뇌 오가노이드는 Syto6(청색), Pax6(적색), Vimentin(녹색)으로 염색되었습니다.
(A) 4배율로 촬영한 이미지. (B) 그림 A의 흰색 상자 내 영역을 확대한 모습. (C) 15배율로 촬영한 이미지. 이미지 제공: LifeCanvas Technologies.
그림 3. iPSC 유래 대뇌 오가노이드의 배양 및 특성 분석에 있어서 Y-27632 dihydrochloride의 적용.
iPSC에서 유래한 대뇌 오가노이드(45일 차)를 Cultrex UltiMatrix RGF 기저막 추출물(#BME001-05)과 뇌 오가노이드 배양 배지를 사용하여 배양하였으며, 이 배지에는 뇌 오가노이드 배양법에 명시된 다른 시약들과 함께 Y-27632 dihydrochloride가 포함되어 있습니다.
(A) 30일 차 iPSC 유래 대뇌 오가노이드의 대표적인 명시야(brightfield) 이미지.
(B) beta III-tubulin(녹색)과 Prox1(적색)으로 염색하고 DAPI(청색)로 대조염색한 대뇌 오가노이드(#5748).
그림 4. 성체 줄기세포 유래 간 오가노이드의 배양 및 특성 분석에 있어서 Y-27632 dihydrochloride의 적용.
성체 줄기세포 유래 간 오가노이드를 Y-27632 dihydrochloride, HEPES( #3173), A 83-01(#2939), Forskolin(#1099), N-Acetylcysteine(#7874) 및 인간 간 오가노이드 배양 프로토콜에 사용되는 기타 시약들을 사용하여 배양하였습니다. 3일 후, HEPES(#3173), Nicotinamide(#4106), N-Acetylcysteine(#7874), A 83-01(#2939) 및 기타 시약들을 포함하는 간 오가노이드 분화 배지로 교체하기 전까지 7~10일 동안 간 오가노이드 증식 배지를 첨가하였습니다. 분화된 인간 간 오가노이드를 (A) Human Serum Albumin 항체(#MAB1455; 적색)와 (B) Human HNF-3beta/FoxA2 항체(#AF2400; 적색)를 사용하여 염색하고 DAPI(#5748; 청색)로 대조염색하였습니다.
그림 5. 성체 줄기세포 유래 인간 하행 결장 오가노이드의 배양 및 특성 분석에 있어서 Y-27632 dihydrochloride의 적용.
인간 하행 결장에서 분리한 성체 줄기세포를 포매(embedding)한 후, Y-27632 dihydrochloride, SB 202190 (#1264), N-Acetylcysteine(#7874), A 83-01(#2939), Nicotinamide(#4106) 및 인간 장 오가노이드 배양 프로토콜에 사용되는 기타 시약들을 포함하는 장 오가노이드 배양 배지에서 30일 동안 배양하였습니다.
(A) 오가노이드를 고정하고 장내 술잔세포(goblet cells)를 시각화하기 위해 Human MUC2 항체(Novus Biologicals; #NBP2-44431; 녹색)로 염색하였으며, Human/Mouse E-Cadherin 항체(#AF748; 적색) 및 DAPI(#5748; 청색)로 대조염색하였습니다.
(B) 오가노이드를 고정하고 장내분비세포(enteroendocrine cells)를 시각화하기 위해 Human Chromogranin A 항체(#MAB90981; 녹색)로 염색하였으며, Human/Mouse E-Cadherin 항체(#AF748; 적색) 및 DAPI(#5748; 청색)로 대조염색하였습니다.
그림 6. 성체 줄기세포 유래 폐 오가노이드의 배양 및 특성 분석에 있어서 Y-27632 dihydrochloride의 적용.
인간 폐 생검 조직에서 분리한 성체 줄기세포를 포매(embedding)한 후, Y-27632 dihydrochloride, HEPES (#3173), N-Acetylcysteine(#7874), A 83-01(#2939), SB 202190(#1264), Nicotinamide(#4106) 및 인간 폐 오가노이드 배양 프로토콜에 사용되는 기타 시약들을 포함하는 폐 오가노이드 증식 배지에서 20~60일 동안 배양하였습니다. 폐 오가노이드는 분화되어 폐의 다양한 세포 유형에 대한 마커들을 발현하였습니다.
폐 오가노이드를 다음 시약들로 염색하였습니다:
(A) 기저 세포(basal cells)를 시각화하기 위해 Human Cytokeratin 5 (KRT5) 항체(녹색)와 Human p63/TP73L 항체(#AF1916; 적색)로 염색하였습니다.
(B) 제1형 폐포 상피 세포(alveolar type I cells)를 시각화하기 위해 Mouse Podoplanin (PDPN) 항체(Novus Biologicals, #NB600-1015; 녹색)로, 기저 세포를 시각화하기 위해 Human p63/TP73L 항체(#AF1916; 적색)로 염색하였습니다.
(C, D) 술잔세포(Goblet cells)를 시각화하기 위해 Mouse MUC5AC 항체(Novus Biologicals, #NBP2-15196; 녹색)와 Human/Mouse/Rat SOX2 항체(#MAB2018; 적색)로 염색하였습니다.
모든 샘플은 DAPI(#5748; 청색)로 대조염색되었습니다.