CRISPR-Ready ioGlutamatergic Neurons | 고마바이오텍

특징

• Gene knockout을 바로 수행할 수 있도록 설계된 neuron 입니다. 
• Cas9 nuclease가 지속적으로 발현되어, 세포 해동 후 1일차에 lentivirus나 lipid를 이용하여 guide RNA (gRNA)를 도입함으로서 수일내에 타겟 유전자의 knockout 및 CRISPR screening 판독값을 측정할 수 있습니다.
• 기능 유전체학, 질병 모델 생성, 약물 표적 식별 등의 실험에 바로 사용 가능합니다. 
• 4일간의 안정화 기간 후, 7일 이내에 VGLUT1 및 VGLUT2 유전자를 80% 이상 발현하는 성숙한 기능성 glutamatergic neuron을 얻을 수 있습니다.
• Cas9 stable iPSC 세포주를 엔지니어링 할 필요가 없어 실험 일정을 수개월 단축시킬 수 있습니다. 

사양 

프로토콜

냉동 보존 형식으로 제공되며 권장 배지에서 재생 시 빠르게 성숙되도록 프로그래밍되어 있습니다.  

Phase 0 단계의 세포를 수령 후, Phase 1, 2 과정을 거쳐 실험에 바로 이용합니다. 

1) Phase 0 : Induction (bit.bio에서 Induction 후 제공)

2) Phase 1 : 고객이 세포를 수령 후 plating 하여 안정화시키는 기간 (4일). guide RNA를 1일과 3일째에 추가 

3) Phase 2 : 세포의 성숙을 유지하는 기간 

실험 과정  

참고 데이터

SOX11 indel formation was measured by amplicon sequencing in CRISPR-Ready ioGlutamatergic Neurons, that were either transfected or transduced with a gRNA targeting SOX11. gRNAs were introduced into the cells either 1 or 3 days after thawing using two methods: lentiviral transduction and synthetic gRNA delivery with Lipofectamine™ RNAiMAX transfection reagent. After 3 days of culture following guide delivery, DNA was harvested for amplicon sequencing of SOX11. Comparable knockout efficiencies were achieved with both lentiviral transduction and lipid-based transfection. A non-targeting gRNA was used as a control.

Immunofluorescent staining on post-revival day 11 demonstrates similar homogenous expression of pan-neuronal proteins MAP2 and TUBB3 (upper panel) and glutamatergic neuron-specific transporter VGLUT2 (lower panel) in CRISPR-Ready ioGlutamatergic Neurons compared to ioGlutamatergic Neurons (io1001). 100X magnification (upper panel). 200x magnification (lower panel).