특징
- ioOligodendrocyte-like cell (희소돌기아교 유사세포)는 pre-myelinating oligodendrocyte 상태와 유사하게 제작된 세포입니다.
- Human O4+ 세포는 OPC 유사 형태를 보이다가, 8일 내에 성숙하여 oligodendrocyte 유사 형태를 갖추게 됩니다.
- Oligodendrocyte 표지 인자인 PDGFRA, PLP1, MBP, CNP, MAG, MYRF를 발현합니다.
- Lot 별로 일관된 whole transcriptome 분석 결과를 보입니다.
- Myelination을 조절하는 화합물 스크리닝에 이용할 수 있으므로, 다발성 경화증(Multiple sclerosis)과 같은 신경 퇴행성 질환 및 탈수초성 질환 약물 연구에 유용합니다.
적용
- Screening of compounds that modulate myelination
- Phenotypic assays
- Target validation
사양
| Starting
material |
Human iPSC line |
| Donor |
Caucasian adult male (skin
fibroblast) |
| Format |
Cryopreserved cells |
| Differentiation
method |
opti-ox™ cellular reprogramming |
| Karyotype |
Normal (46, XY) |
| Vial size |
Small: 1 x 10^6 viable cells |
| Recommended
seeding density |
27,000 cells/cm2 |
| Seeding
compatibility |
6, 12 and 24 well plates |
| Quality
control |
Sterility, protein expression (ICC),
gene expression (RT-qPCR) |
프로토콜
ioOligodendrocyte-like cell은 냉동 보존 형식으로 제공되며 권장 배지에서 재생 시 빠르게 성숙되도록 프로그래밍되어 있습니다.
Phase 0 단계의 세포를 수령 후, Phase 1, 2 과정을 거쳐 실험에 바로 이용합니다.
1) Phase 0 : Induction (bit.bio에서 Induction 후 제공)
2) Phase 1 : 고객이 세포를 수령 후 plating 하여 안정화시키는 기간 (1일)
3) Phase 2 : 세포가 성숙하는 기간
참고 데이터
1. The opti-ox powered cells rapidly mature, transitioning into an oligodendrocyte-like morphology within 8 days
냉동보존된 ioOligodendrocyte-like cell의 해동 후, 신속하고 균질하게 희돌기아교세포 유사 형태로 성장하는 과정을 저속 촬영한 8일간의 타임랩스 비디오입니다.
2. ioOligodendrocyte-like cells express oligodendroglial-specific markers
cell revival 후 1일째(상부 패널) 및 8일째(하부 패널)에 세포의 면역형광 염색 이미지 입니다. 1일째에 세포는 희돌기아교세포 특이적 마커인 O4(빨간색)를 발현하고, 8일째에 복잡성이 증가되며 O4(빨간색), myelin basic protein(MBP)(녹색)을 발현합니다.
3. Cells show an oligodendrocyte-like morphology by day 8
리프로그래밍 시 세포는 급속한 형태학적 변화를 보여 revival 후 1일째까지 OPC와 유사한 형태를 획득합니다. 8일째까지 세포는 성숙되어 희소돌기아교세포와 유사한 형태를 나타냅니다.
4. Key oligodendroglial genes are expressed by ioOligodendrocyte-like cells
리프로그래밍 후 세포는 다능성 유전자 OCT4의 발현을 하향 조절하는 동시에 PDGFRA, PLP1, MBP, CNP, MAG 및 MYRF를 포함한 희돌기아교세포 마커의 강력한 발현을 입증합니다.
5. Whole transcriptome analysis demonstrates high lot-to-lot consistency of ioOligodendrocyte-like cells
revival 후 1일차와 8일차에 제조된 제품의 세 가지 다른 로트에 대해 대량 RNA 서열 분석을 수행했습니다. 주성분 분석(PCA)은 ioOligodendrocyte 유사 세포의 세 가지 서로 다른 로트 간의 유전자 발현의 차이를 나타냅니다. 이 분석은 주어진 각 시점에서 높은 일관성을 보여주는 매우 긴밀한 로트 클러스터링을 보여줍니다. 모든 vial의 이러한 lot 간 일관성은 험 재현성에 대한 확신을 줍니다. 색상은 parental non-induced hiPSC cell line과 ioOligodendrocyte 유사 세포 3개 로트를 나타냅니다. 모양은 서로 다른 시점을 나타냅니다.
