1. Direct PCR이란 무엇인가요?
Biological 샘플내에는 PCR을 방해하는 많은 요소들이 존재합니다. 이 요소들로 인해 항상 DNA를 샘플로부터 추출해서 PCR을 수행해야만 했습니다. Direct PCR은 이러한 DNA purification 과정없이도 샘플에서 바로 PCR을 할수 있는 방법을 말합니다.
2. 어떻게 Direct PCR이 가능한가요?
Direct PCR buffer내의 성분이 PCR을 방해하는 요소들의 활성을 중성화시켜 작용하지 못하도록 합니다.
3. 어떤 샘플들이 Direct PCR에 적용이 되나요?
blood, 오래된 blood, 혈흔, saliva, sputum, sperm, hair root 등의 biological sample 뿐 아니라, plant, mouse tail, tissue, cultured cell, bacteria, virus등의 샘플로도 Direct PCR 이 가능합니다. 단, 단단한 조직으로 감싸있는 샘플들 (mouse tail, 조직, cell 등..)은 lysis buffer로 한번 처리를 해준후, lysis soup을 그대로 따서 Direct PCR에 이용합니다.
4. 사용방법은 어떻게 되나요?
기존에 사용하시는 Taq reaction buffer 대신 Direct PCR buffer로 대체하여 사용합니다. Direct MasterMix의 경우에는 이미 Direct PCR Buffer와 Taq enzyme이 최적화되어 mixture로 제공되므로 바로 사용하시면 됩니다.
5. 일반적인 PCR 조건과 차이가 있나요?
일반적인 PCR 조건과 동일합니다. 단, DNA로 실험할때보다 5 cycle 정도를 더 추가하여 런닝하는것이 좋습니다.
6. Direct PCR을 이용하면 어떤점이 좋은가요?
우선 샘플로부터 DNA를 뽑지 않아도 되어, DNA purification에 드는 비용과 시간을 절약할수 있습니다. 또한, DNA 핸들링이 거의 없으므로, DNA가 오염되는 일이 거의 없으며, 소중한 샘플의 loss 걱정도 줄어듭니다.
7. 다른 회사의 Taq과도 호환이 되나요?
네, 호환됩니다.
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