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Leukocyte-Endothelium Adhesion Assay Kit 이미지

Leukocyte-Endothelium Adhesion Assay Kit

Maker : CELL BIOLABS

CytoSelect Leukocyte-Endothelium Adhesion Assay Kit는 내피세포를 투과한 leukocyte를 측정함으로써, 백혈구와 내피세포 간의 상호작용을 정량적으로 측정합니다.

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특징

 

암세포가 다른 조직으로 전이(metastasis)될 때, 암세포가 혈관 내피세포에 달라붙어 혈관 밖으로 빠져나가는 과정은 매우 중요합니다. 이 분석법은 암세포가 얼마나 효율적으로 내피세포에 부착되는지를 측정하여 전이 능력이나 그 기전을 연구할 때 매우 유용합니다.

 

  • 혈관내피와 백혈구 또는 종양 세포의 상호 작용은 세포가 내피세포의 접착분자 (endothelial cell adhesion molecule)에 부착하는 일련의 과정으로 구성됩니다.
  • CytoSelect™ Leukocyte Endothelium Adhesion Assay는 백혈구와 내피 사이의 상호작용을 정량적으로 측정하기 위한 강력한 시스템을 제공합니다.
  • 부착 세포는 형광 플레이트 판독기에서 쉽게 정량화할 수 있습니다.
  • 내피 세포들을 activator나 inhibitor로 처리후 배양하고, leukocyte를 LeukoTracker로 라벨링하여 cell에 처리하면 내피세포를 투과한 leukocyte의 수를 정량할 수 있습니다.





원리

  

  • 내피세포를 배양하여 monolayer를 형성하고, 원하는 activator나 inhibitor로 처리합니다.  백혈구는 LeukoTracker™로 표지된 후 pellet, wash, resuspend 됩니다. 백혈구를 내피세포 monolayer에 추가하고 배양한 후 부착된 백혈구를 세척, 용해 후 fluorometer로 정량합니다. 

   

 


   

Kit 구성품

 

  • 500 X LeukoTracker™ Solution
  • Gelatin Solution
  • 4 X Lysis Buffer
  • 10 X Wash Buffer
  • TNFα 


실험 데이터


인간 단핵구 THP-1 세포의 정량화: LeukoTracker™로 표지된 THP-1 세포를 1X PBS에 단계적으로 희석한 후, 2X Lysis Buffer를 사용하여 용해했습니다(세포 부유액 75 µL와 2X Lysis Buffer 75 µL를 혼합). 형광 강도는 분석 프로토콜에 기술된 대로 정량화하였습니다.

 
HUVEC 단층에 대한 인간 단핵구 THP-1의 부착: 48well plate의 HUVEC 단층을 1 µM PMA로 12시간 동안 처리하였습니다. (이후) LeukoTracker™로 표지된 THP-1 세포를 HUVEC 단층에 1시간 동안 부착시켰습니다. 부착된 세포들을 용해한 뒤, 분석 프로토콜에 기술된 방식대로 정량화하였습니다.




HUVEC에 대한 인간 단핵구 THP-1의 사이토카인 활성 유도 부착 실험: HUVEC 단층(왼쪽 조건) 또는 THP-1 세포(오른쪽 조건)에 50 ng/mL의 TNFα 또는 1 µM의 PMA를 12시간 동안 처리하였습니다. 이후 LeukoTracker™로 표지된 THP-1 세포(웰당 50,000개)를 HUVEC 단층에 1시간 동안 부착시켰습니다. 부착된 세포들을 용해한 뒤, 분석 프로토콜에 기술된 방식대로 정량화하였습니다.


사용 논문

CBA-210 　
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CytoSelect™ 96-well Leukocyte-endothelium Adhesion Kit CBA-210 100 assays CELL BIOLABS
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