[NETRI] 3D 오가노이드 제작을 위한 Duplex Organoid-on-chip

제품 상세

[NETRI] 3D 오가노이드 제작을 위한 Duplex Organoid-on-chip

오가노이드 등 3D cell culture를 위한 microfluidic device인 Duplex chip을 소개합니다.

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특징

NETRI Duplex well 3D OoC는 Human brain cell 조직을 대체하여 약물의 대용량 스크리닝이나 뇌독성 평가에 이용되는 Cerebral organoid를 제작하기 위한 미세유체칩 입니다.
기존의 24well plate와는 달리, cell과 media 처리 공간을 구분함으로써, Cerebral organoid가 균일하고 일정한 크기로 성장하고, necrotic core의 생성을 막아, 재현성있는 결과를 제공합니다.

Duplex Well 포맷

Cell을 seeding하는 open well과 media를 처리하는 large channel로 구성되어 있고, 하단의 porous membrane을 통해 media가 cell에 공급됩니다.
Large channel을 통해 media 공급과 제거가 용이합니다.

Brain Organoid-On-Chip 프로토콜

D0 : hiPSC로부터 Embryoid Body (EB) 생성
D2 : EB를 회수하여 dorsal forebrain으로 분화
D18 : NETRI 3D Duplex Well에 처리
D60 : 배양 완료. RNA expression level 확인됨. 세포구조 조직 개선
최대 D120까지 viability와 morphology 유지

실험 결과

1. Reproducibility 비교 실험 (24-well plate vs. 3D Duplex Well)

D18-D60까지 배양하며 성장패턴을 비교하였을때, 3D Duplex well에서는 오가노이드의 크기 분산이 낮고 균일하게 성장하여, variability가 적었습니다.

또한 oval 형태 및 organoid border를 잘 유지하였습니다.

Figure 1. Cerebral organoid sizes and growth evolutions from D+18 until D+60 of culture, for on-chip organoids and control organoids cultured in 24-well plates. On-chip organoids exhibit more reproducible surface areas (24-well plate: n=9; Duplex Well: n=27).

Lower size dispersions for organoids on-chip compared with organoids cultured in 24-well plates reduced variability
Smaller average organoid sizes on-chip could be due to the culture in a constraint environment
Observed with two hiPSCs lines

Figure 2. Immunofluorescence staining of neural progenitors (SOX2) and neurons (TUBB3) in cerebral organoids after 60 days of culture. (Thunder microscope, Leica, objective 10X).