[FAQ] 8-OHG RNA Damage ELISA Kit에 포함되어 있는 항체는 8-OHdG도 감지할 수 있나요? | 고마바이오텍

1. 8-OHG RNA Damage ELISA Kit에 포함되어 있는 항체는 8-OHdG도 감지할 수 있나요? 

8-OHG키트에 사용된 1차 항체는 단클론항체이며, 8-OHdG와도 반응합니다. 8-OHG를 특이적으로 검출하려면 정제된 RNA 샘플을 사용하는 것을 권장합니다. 소변, 혈청, 또는 뇌척수액 샘플을 사용하는 경우 8-OHdG와 8-OHG 모두 검출됩니다.

2. RNA는 얼마나 필요한가요?

1-5mg/ml RNA 50µL, 즉 50-250µg 정도의 RNA가 필요합니다. 최소 6 µg/well을 추가한다면, 이 정도로 농축하지 않아도 괜찮습니다.

3. Nuclease P1과 alkaline phosphatase는 어떤 제품을 사용하는 것이 좋을까요

Nuclease P1은 Sigma #N8630을, alkaline phosphatase는 Sigma #P5931을 사용하는 것을 권장합니다.

4. Nuclease P1을 준비하려면 어떤 버퍼를 이용해야 하나요?  

30mM Sodium Acetate, pH5.2와 5mM Zinc입니다.

5. Plasma 샘플에 사용할 수 있나요? 

이 키트에 사용된 항체는 8-OHG와 8-OHdG를 구분할 수 없기 때문에 혈장 샘플은 8-OHG ELISA를 사용하기에 적절하지 않습니다. 8-OHG 수준을 측정할 수 있는 유일한 방법은 정제된 RNA 샘플을 사용하는 것입니다. 8-OHG와 8-OHdG 모두 검출되는 것이 문제가 되지 않으면, 희석된 혈장샘플을 사용해도 괜찮습니다. 샘플이 표준 곡선 내에 속하는 데 필요한 희석을 결정하기 위해 실험을 실행하기 전에 샘플 적정을 수행하는 것을 권장합니다. 

6. 박테리아 세포에 사용할 수 있나요? 

이 키트는 분리된 RNA 샘플을 사용하므로 박테리아에서 추출한 RNA를 사용할 수 있습니다. 

7. 표준 곡선을 만들고 결과를 계산하려면 어떻게 해야 하나요? 

표준 곡선에서 농도를 결정하는 가장 좋은 방법은 4-Parameter curve fitting program을 사용하는 것입니다. 하지만 이 소프트웨어가 없다면 Excel을 사용하여 계산할 수 있습니다. 표준 곡선 그래프로 그릴 때, x축을 로그 스케일로 설정하고 선형 또는 로그 추세선을 생성하세요. ELISA로 생성된 표준 곡선은 일반적으로 선형이 아니지만, 샘플 값이 이 범위 내에 속하는 한, 곡선의 상위 값과 하위 값을 제거하여 직선을 생성할 수 있습니다. 표준 곡선의 중간 부분은 가장 민감하며 샘플을 정량화하기 위해 사용하기 가장 좋은 부분입니다. 선형 라인의 경우 (OD 값-b)/m 또는 로그 라인의 경우 ln (x)=(OD 값-b)/m인, 추세선 방정식 y= mx에서 x를 계산하여 미지수의 농도를 구할 수 있습니다.

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