마이코플라즈마 PCR 확인 | Mycoplasma PCR Detection Kit | 고마바이오텍

1) Myco-sniff™ mycoplasma PCR detection kit (#093050201) 

Myco-Sniff™ Mycoplasma PCR Detection Kit는 세포 배양에서 마이코플라즈마 오염을 검출하기 위한 매우 민감도와 특이도가 높은 방법입니다. 이 키트를 사용하면, 3시간 이내 세포배양에서 마이코플라즈마 오염 여부를 검출하실 수 있습니다. PCR 후 마이코플라즈마의 오염 여부는 전기영동 상에서 특정DNA 밴드 증폭여부로 쉽게 확인이 가능합니다.  

Myco-Sniff™ Mycoplasma PCR Detection Kit는 다른 PCR 방식의 마이코플라즈마 검출 Kit에 비해 더 광범위한 마이코플라즈마 종을 검출할 수 있습니다. Kit에 사용된 고유의 primer set는 관련된 마이코플라즈마 종에서 고도로 보존된 16s rRNA를 코딩하는 DNA 염기서열로부터 설계되었으며, 따라서 다른 종으로부터의 DNA 증폭을 방지합니다. 이 kit는 검출 민감도가 높아 20 CFU/ml의 마이코플라즈마 까지도 검출이 가능합니다.

Myco-Sniff™ Mycoplasma PCR Detection Kit에는 exogenous internal control 이 포함되어 있어, 마이코플라즈마 부재에 의한 음성반응을 PCR inhibition과 구별할 수 있습니다. Kit에 포함되어 있는 primer set은 internal control과 target DNA를 증폭하는데 사용되며, internal control과 target DNA는 사이즈로 구분됩니다. Kit의 positive control sample은 template DNA의 유효성을 확인하고, Positive sample의 PCR product 사이즈를 확인하는 목적으로 사용됩니다.  또한 Kit에는 8-methoxypsoralen (8-MOP)가 포함되어 있으며, 이것은 이전 실험의 PCR product로 인한  교차오염(cross-contamination)을 예방하는 목적으로 사용할 수 있습니다.

 각 kit에는 20ul 반응액 기준 48개의 PCR lyophilized tube가 포함되어 있습니다.

장점:  

• 높은 민감도: 검출한도 20 CFU/ml
• 마이코플라즈마의 광범위한 검출범위: 209종(species)을 포함한 8개 속(genera) 이상의 마이코플라즈마 검출 가능
• 간편하게 사용가능한 pre-mix 타입: PCR 반응액에 필요한 모든 성분들이 포함되어 있으며, 간단하게 template DNA나 샘플만 첨가하여 실험진행
• 높은 특이도: 동물 혹은 세균 DNA에 의한 간섭현상 없음
• 빠른 실험시간: 3시간 이내 검출 가능
• 교차오염 방지: 8-MOP가 포함되어 있어 이전 PCR product로 부터의 교차오염을 예방 가능
• Exogenous internal control: PCR inhibition이나 잘못된 PCR 진행으로 인한 위 음성(false negative) 결과를 구분 가능
• Sample control: sample control DNA의 증폭여부를 통해 template gDNA의 유효성을 쉽게 확인 가능

2) Myco-sniff-valid™ mycoplasma PCR detection kit (#093050301)  

Myco-Sniff™-Valid Mycoplasma PCR Detection Kit는 세포 배양에서 마이코플라즈마 오염을 검출하기 위한 매우 민감도와 특이도가 높은 방법입니다. 이 kit에는M. pneumoniae, M. hyorhinis, M. fermentans, M. orale and A. laidlawii 등에서 고도로 보존된 16s rRNA를 코딩하는 염기서열에 대한 특화된 primer set를 포함하고 있습니다. 검출은 3시간 이내 가능하며, 10 CFU/ml의 마이코플라즈마까지 검출할 수 있습니다.

Myco-Sniff™-Valid Mycoplasma PCR Detection Kit에는exogenous internal control 이 포함되어 있어, 마이코플라즈마 부재에 의한 음성반응을 PCR inhibition과 구별할 수 있습니다. Kit에 포함되어 있는 primer set은 internal control과 target DNA를 증폭하는데 사용되며, internal control과 target DNA는 사이즈로 구분됩니다. Kit의 positive control sample은 template DNA의 유효성을 확인하고, Positive sample의 PCR product 사이즈를 확인하는 목적으로 사용됩니다.  또한 Kit에는 8-methoxypsoralen (8-MOP)가 포함되어 있으며, 이것은 이전 실험의 PCR product로 인한 교차오염(cross-contamination)을 방지하는 목적으로 사용할 수 있습니다.

각 kit에는 20ul 반응액 기준 48개의 PCR lyophilized tube가 포함되어 있습니다.

장점 :  

• 높은 민감도: 검출한도 10 CFU/ml
• 신뢰성: 유럽 약전 (European Pharmacopoeia) 가이드라인과 규정을 만족. 제품 출하 테스트 및 in-process control에 적합. 기존 마이코플라즈마 부정시험의 배양법 및 indicator cell culture법의 대체방법으로 사용가능
• 빠른 실험시간: 3시간 이내 검출 가능
• 마이코플라즈마의 광범위한 검출범위: 일반적으로 세포배양에서 오염되는 마이코플라즈마 종을 포함한 다양한 마이코플라즈마 종을 검출 가능
• 간편하게 사용가능한 pre-mix 타입: PCR 반응액에 필요한 모든 성분들이 포함되어 있으며, 간단하게 template DNA나 샘플만 첨가하여 실험진행
• 높은 특이도: 동물 혹은 세균 DNA에 의한 간섭현상 없음
• Exogenous internal control: PCR inhibition이나 잘못된 PCR 진행으로 인한 위 음성(false negative) 결과를 구분 가능
• Sample control: sample control DNA의 증폭여부를 통해 template gDNA의 유효성을 쉽게 확인 가능

사용 방법

• Step 1 : DNA 추출 (boiling 혹은 genomic DNA 추출 kit 이용)
• Step 2 : PCR 반응 (pre-aliquoted tube로 간편하게 이용)
• Step 3 : 전기영동 확인 (band 패턴으로 오염여부 확인)  

데이터

• Lane 1에서 sample control, target, internal control 모두에서 밴드가 확인되므로 mycoplasma 오염된 샘플임을 확인할 수 있습니다.