[FAQ] ELISA Kit 개발 지표 5가지

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Maker : NOVUS BIOLOGICALS

ELISA kit 개발 시, 성능을 평가하고 결과를 검증하기 위한 5가지 주요 지표를 설명합니다.

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ELISA 개발 지표

시료의 농도는 분석물과 항체 간의 상호작용에 따라서 달라집니다. 많은 요인이 이러한 상호작용에 영향을 미칠 수 있으므로 분석 성능을 평가하고 결과를 검증하려면 아래의 주요 지표를 적용하는 것이 필수적 입니다.

1. Standard curve (표준 곡선)

Standard curve는 분석물의 검출 가능한 농도 범위를 나타내며 정제된 분석물 (예: 재조합 단백질)의 연속 희석을 포함합니다.
각 표준 물질의 농도는 평균 판독값의 측정값 (optical density; OD)이 표시되고, 그래프를 그려 unkown sample의 분석물 양을 계산합니다. ]

2. Sensitivity (민감도)

검출 하한 (lower limit of detection; LOD) 또는 최소 검출 가능 농도 (minimal detectable dose; MDD)는 측정 가능한 최저 값입니다.
이는 zero standard 평균 OD값을 아래 방정식에 대입하여 standard curve에서 해당 농도를 결정하여 계산됩니다.

Sensitivity = 2 x standard deviation_{zero standard} + Mean_{zero standard}

3. Precision (정밀도)

%CV = (Standard deviation/Mean) x 100%

4. Spike Recovery (회수율)

% Recovery = ((Concentration _{spiked sasmple} - Concentration _endogenous) / Concentration _{control spike) * 100%}

_{5. Linearity (직선성)}

_{생물학적 샘플 또는 spiked 샘플은 1:2, 1:4 및 1:8과 같이 연속적으로 희석됩니다.}
_{희석 계열의 분석물 농도가 분석의 검출 범위 내에 있는 경우 정규화된 분석물 농도 (희석 계수 고려)는 동일해야 합니다.}
아래 그림에서 노란색 선으로 표시된 생물학적 샘플은 허용 가능한 linearity를 나타내는 반면, 파란색 선으로 표시된 생물학적 샘플은 간섭요인으로 인해 분석물의 정확한 측정이 방해되었음을 나타냅니다.
Linearity는 80~120% 사이에서 허용됩니다.

% Recovery = ((Concentration _{dilution sasmple} / Dilution) / Concentration _{undiluted spike) * 100%}