1. Cultrex® 기저막 추출물(BME)은 세포 분화를 어떻게 촉진하나요?
모든 상피 및 내피 세포는 적어도 하나의 표면에서 기저막 매트릭스와 접촉하고 있습니다. 세포에 자연적인 매트릭스를 제공함으로써 세포가 생리학적 형태(즉, 올바른 형태)를 가질 수 있도록 하고 세포 계통 특이 단백질의 발현을 시작할 수 있습니다. 2차원 플라스틱 표면과 혈청이 포함된 배지를 조합하면 세포가 평평해지고, 증식하며, 탈분화됩니다.
2. Cultrex 기저막 추출물(BME)은 어떻게 보관하고 다뤄야 하나요?
모든 주식 용액은 장기 보관을 위해 -80 °C에서 보관해야 합니다 (1개월 이상).
참고: Cultrex ReadyBME는 미리 희석되어 있으며, 2-8 °C에서 보관해야 하며 절대 얼리면 안됩니다.
얼린 Cultrex BME 매트릭스는 2-8 °C 냉장고에서 하룻밤 동안 얼음 위에서 해동합니다. 이렇게 하면 제품을 안정적인 저온에서 유지하면서 충분히 해동할 수 있습니다. 작업량에 맞게 분주한 후, 분주한 용액은 장기 보관을 위해 -80 °C에서 보관합니다. Cultrex BME 매트릭스를 2-8 °C에서 1일 이상 보관하면 안됩니다. Cultrex BME 매트릭스는 온도가 18 °C 이상일 경우 젤화되므로, 항상 얼음 위에서 신속하게 작업하고, 피펫 팁과 같은 미리 냉각된 용품과 도구를 사용해야 합니다. Cultrex BME 매트릭스는 항상 얼음 차가운 세포 배양 매체로 희석해야 됩니다.
3. Cultrex® 기저막 추출물(BME)에 이식된 비종양 세포/조직은 어떻게 성장하거나 분화하나요?
비변형 세포가 Cultrex® BME와 혼합되어 이식되면 생존을 계속하고 분화된 상태를 유지하지만 일반적으로 성장하지 않습니다. 이러한 조건에서 정상 조직이 변형된 사례는 없습니다. 예를 들어, 세르톨리 세포는 최소한 일주일 동안 생존하며 그들의 끈 모양 구조를 유지합니다.
4. 내 필요에 맞게 Cultrex BME의 인장 강도를 조정할 수 있나요?
인장 강도는 젤화된 기저막 또는 ECM 단백질의 강성을 의미합니다. BME는 자연적으로 생성된 물질이므로 이 강성은 사용하는 BME의 농도를 조정하여만 변경할 수 있습니다. 농축된 매트릭스는 희석된 매트릭스보다 높은 인장 강도를 가지며, 희석된 매트릭스는 낮은 단백질 농도와 단백질 교차 결합 기회가 적습니다. 예를 들어, 새로운 Cultrex UltiMatrix BME는 높은 온도에서 젤화될 때 강성이 증가하며, 인장 강도를 보다 쉽게 조정할 수 있도록 높은 농도로 제공됩니다.
5. 3-D 배양이란 무엇인가요?
3-D 배양은 불멸화된 세포주, 원주 세포주, 줄기세포 또는 조직 이식편이 Cultrex 기저막 추출물과 같은 하이드로겔 매트릭스 내에 배치되어 생체 내 세포 환경을 모방하고 세포가 3차원으로 증식할 수 있도록 하는 in vitro 배양입니다.
6. 3-D 배양의 다양한 유형은 무엇인가요?
3-D 배양을 수행하는 두 가지 주요 방법은 상부 분석법과 내장 분석법입니다. 상부 분석법에서는 세포가 Cultrex 기저막 추출물(BME) 또는 세포외 기질 단백질의 두꺼운 젤 위에 배양됩니다. 그런 다음 세포 위에 얇은 세포 배양 매체가 적용됩니다. 내장 분석법에서는 세포가 Cultrex BME 또는 ECM의 두꺼운 젤 내에 재현탁되고 배양 매체가 위에 적용됩니다. 상부 분석법은 설정이 더 쉽고, 세포 밀도를 조절하기 용이하며, 분석을 위해 세포를 하나의 초점 평면 내에 유지하는 데 유리합니다.
7. 3-D 배양과 관련된 변수는 무엇인가요?
3-D 배양과 관련된 주요 변수는 세포 유형, 세포 밀도, 하이드로겔의 조성, 하이드로겔의 두께, 하이드로겔의 강성, 세포 배양 매체의 조성 및 배양 시간입니다.
8. 전통적인 2-D 배양에 비해 3-D 배양의 장점은 무엇인가요?
2-D 배양은 세포 기능 및 행동의 많은 측면을 연구하는 데 사용되어 왔지만, 조직 배양 처리된 플라스틱 환경은 살아있는 유기체 내에서 발견되는 것과는 다릅니다. 그 결과, 2-D 배양의 세포는 발생하는 조직과 비교할 때 형태, 기능, 증식 및 유전자 발현이 변화합니다. 이러한 세포를 3-D 환경에 배치함으로써 생체 내에서 관찰되는 것과 유사한 생물학적 및 생화학적 특성을 가질 수 있습니다.
9. Cultrex® 기저막 추출물(BME)과 Cultrex® 3D 배양 매트릭스의 차이점은 무엇인가요?
Cultrex® 3D 배양 매트릭스는 3D 배양에 사용하기 위해 가장 표준화된 기저막 추출물을 제공하기 위해 개발되었습니다. 성장 인자를 줄이기 위해 특별한 공정이 적용됩니다. 이 물질은 3D 배양에 통합되어 효능을 검증합니다. 3D 배양 기저막 추출물은 유방선(MCF-10A) 및 인간 전립선(PC-3)에서 유래한 인간 상피 세포주가 아시나(acinar) 구조로 분화하는 것을 촉진합니다. Cultrex® 3D 배양 매트릭스는 기본적으로 표준 Cultrex® BME와 동일하지만, 위에서 설명한 기능적 3D 분석법으로 추가적으로 검증되었습니다.
10. Cultrex® 기저막 추출물, PathClear, 카탈로그 # 3432-010-01의 라미닌 I 비율은 얼마인가요?
Cultrex® 기저막 추출물(BME), Pathclear는 ≤ 60%의 라미닌(Laminin) I로 구성되어 있습니다. 라미닌은 Cultrex BME의 주요 성분입니다. 다른 성분으로는 ≤ 40%의 콜라겐 IV와 ≤ 10%의 엔탁틴(Entactin)이 있습니다.
11. 튜브 형성 분석법(Tube Formation Assay)이란 무엇인가요?
튜브 형성 분석법은 내피 세포가 재구성된 기저막의 하이드로겔에서 배양될 때 3차원 모세혈관과 같은 관 구조를 형성하는 능력에 기반합니다. 이 하이드로겔은 Cultrex 기저막 추출물(BME)과 같은 것입니다.
12. Cultrex® BME와 함께 생체 내에서 성장하는 종양 세포 또는 생검 샘플은 어떤 것이 있나요?
많은 세포주와 종양 생검 샘플(보통 작은 조각으로 잘라짐)이 Cultrex® BME와 함께 이식될 때 생체 내에서 성장하는 것으로 나타났습니다. 여기에는 흑색종, 장, 전립선, 유방, 폐, 신장 및 간암과 3T3 마우스 배아 섬유아세포 세포주가 포함됩니다.
13. Cultrex BME 제품을 사용한 오르가노이드 배양 및 기타 배양에 추천되는 배양 플레이트는 무엇인가요?
조직 배양 처리된 모든 플레이트는 Cultrex 돔/Cultrex 코팅을 결합합니다. 비처리 또는 낮은 부착성 플레이트는 오르가노이드 성장 및 코팅된 BME를 사용하는 다른 세포 배양에 권장되지 않습니다. 비처리 또는 낮은 부착성 플레이트를 사용할 경우 돔이 떠오를 수 있습니다. Bio-Techne는 다음과 같은 플레이트를 사용했습니다: Corning 96-well, 카탈로그 # 3595; Corning 24-well, 카탈로그 # 3526; ThermoFisher 6-well, 카탈로그 # 140675.
14. 3-D 배양에 어떤 매트릭스를 사용해야 하나요?
매트릭스의 선택은 재현하고자 하는 환경에 따라 달라져야 합니다. 다음 링크의 유용한 가이드를 참조하시기 바랍니다: Bio-Techne 매트릭스 가이드
15. 침습 연구에 가장 적합한 기저막 단백질은 무엇인가요?
매트릭스의 선택은 재현하고자 하는 환경에 따라 달라져야 합니다. Cultrex 기저막 추출물(BME)은 대부분의 상피 또는 내피 기원의 세포 아래에 있는 기저막을 재현합니다. Cultrex 콜라겐 I은 결합 조직의 주요 성분이며, 일반적으로 섬유아세포, 지방 세포와 같은 정지 세포 및 비만 세포, 대식세포, 단핵구, 림프구, 형질 세포 및 호산구와 같은 이동 세포가 서식하는 곳입니다.
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