1. mRNA는 어느정도의 길이로 제작되나요?
100bp - 20kb 길이의 mRNA를 만들 수 있습니다. 100bp보다 짧을 경우, 올리고 합성팀에서 화학적 합성을 진행해 드립니다.
2. RUO와 전임상 등급의 차이점은 무엇인가요?
RUO 등급 mRNA의 경우, silica membrane이나 LiCl 침전 방법으로 정제 진행합니다.
전임상 등급에서는 RNA 순도 향상을 위해 HPLC 기반 정제 방법으로 진행합니다. 5kb를 초과하는 긴 mRNA 의 경우나 높은 순도의 mRNA가 필요할 경우 전임상 grade 서비스를 제안드립니다.
3. 특정 mRNA 수율/양을 보장하나요?
네. 특정 양의 mRNA가 전달되도록 보장합니다 .
4. 제공되는 농도는 얼마인가요?
기본적으로 0.5-2mg/mL의 농도로 제공합니다. 추가 비용으로 요청에 따라 농도를 특정 값 <4mg /mL로 조정할 수 있습니다.
5. 어떤 buffer 옵션이 있나요?
1mM sodium citrate, TE pH7 , RNase-Free H2O 중 선택하실 수 있습니다.
1mM sodium citrate buffer는 mRNA 안정성을 위한 기본 옵션입니다.
6. mRNA와 long RNA는 어떻게 보관해야 하나요?
mRNA는 -80°C에 보관하고 동결 및 해동 주기를 피할 경우 최소 1년동안 안정적입니다. (mRNA 종류 따라 다를 수 있습니다)
최대 3번의 동결/해동 주기까지 mRNA가 안정적인 것을 확인하였습니다.
장기간 보관할 경우 -80°C, 단기간 보관할 경우 -20°C 에서 보관하는 것이 좋습니다.
7. mRNA 정제는 어떻게 진행하나요?
연구용 등급의 경우 silica membrane이나 LiCl precipitation 방법을 적용합니다.
비임상등급의 경우 HPLC 기반 Oligo dT정제 방법을 적용합니다.
추가 옵션으로 잔량의 triphosphate RNA를 탈인산화 서비스 적용하여 제거하므로 면역원성을 낮출 수 있고, 더 높은 mRNA 순도 필요 시 dsRNA 제거하는 HPLC정제를 적용해드릴 수 있습니다.
8. dsRNA 제거를 위해 어느 방법을 적용하나요?
Cellulose기반의 HPLC방법을 적용합니다.
9. mRNA 의 순도는 어떤 방식으로 확인되나요?
크기 기반 순도 규정을 위해, mRNA 샘플을 bioanalyzer에서 실행한 다음 전체 AUC에 대한 주요 피크(표적 크기 +-15%) 의 비율을 계산합니다.
10. 탈인산화의 기능은 무엇인가요?
탈인산화를 함으로써 mRNA 샘플에 존재하는 triphosphate-RNA를 제거하여 면역원성을 감소하여 형질감염된 세포를 더 건강하게 만들고 표적 단백질 발현을 더 잘 할 수 있습니다 .
11. mRNA modification 의 기능은 무엇인가요?
mRNA의 안정성에 좋고 면역원성이 감소됩니다.
12. 어떤 modified base를 적용하나요?
Uridine 염기를 5-moU, N1-me-Ψ, Ψ, 5'-iodourdine 또는 Cy5-UTP로 대체할 수 있습니다.
Cytidine 염기를 5-me-C, 5’-iodocytidine 아니면 thiol-CTP로 대체할 수 있습니다.
고객 맞춤으로 요청한 대체비율로 제작이 가능합니다. 특정 위치 지정은 어렵습니다.
13. Capping의 기능은 무엇인가요?
Capping은 RNA의 안정화를 도와 ribosome과 결합하게 합니다.
Exonuclease degradation을 고려했을 때 Cap 0 보다 Cap 1과 Cap2가 mRNA 안정화에 큰 임팩트를 줍니다.
Mammalian cell에는 Cap 1을 적용하고, Plant cell에는 Cap 0를 적용합니다.
Cap2는 당사가 개발하여 Cap1보다 면역 스트레스 상태의 Mammalian cell에 더 잘 작동하는 solution입니다.
14. 어떤 종류의 5' cap을 제공할 수 있나요?
Co-transcriptional capping 방법의 Cap1이 기본 옵션입니다.
추가 비용으로 효소 capping 방법으로 Cap 0과 Cap 1 제공도 가능하며, Co-transcriptional capping 방법으로 Cap2 제공도 가능합니다 .
15. Capping 효율은 어떻게 되나요?
GenScript사의 독점 capping 기술로 97% 이상을 달성할 수 있습니다.
16. Cap efficiency 분석 서비스를 제공하나요?
네. 효소 분해/LC-MS 방법을 적용한 분석 서비스 제공이 가능합니다.
17. mRNA제작을 위해 어느 template이 적용되나요? Template은 어떻게 만들어지나요?
Linerized DNA plasmid를 template로 적용합니다. 당사 독점의 vector에 타깃 유전자를 넣어 진행할 수 있고, 고객 제공 plasmid 적용도 가능합니다.
Plasmid 제작 디자인 내용이 합의되면, 유전자와 mRNA를 제작을 진행하며, 최종적으로 mRNA 샘플을 제공해드립니다.
18. 자체의 UTR적용도 가능한가요?
네. 가능합니다.
19. T7 promoter의 조건은 무엇인가요?
Co-transcriptional capping 기술을 사용하여 Cap1 mRNA를 제작하기 위하여 T7 promoter 서열에 이어 AGG 나 GGG 서열이 필요합니다.
자가 증폭 RNA의 경우는 이어서 ATG서열이 필요합니다.
20. mRNA 코돈 최적화 서비스도 제공되나요?
네. 가능합니다.
21. 당사 통해 제작된 유전자 서비스 plasmid 제작물을 mRNA 제작 서비스에도 적용이 가능하나요?
네. ORF 서열을 당사 독점 vector로 subcloning해서 진행이 가능합니다.
22. Poly A length assay에 어느 효소를 적용하나요?
RNase T1 효소를 적용합니다.
23. 고객이 제공한 mRNA 샘플의 QC 분석이 가능하나요?
가능합니다. (QC 서비스 목록 확인하기)
24. 24-well plates cell culture 규모 형질감염에 필요한 mRNA 양은 어떻게 되나요?
일반적으로 0.5 ug-1 ug의 mRNA가 적용됩니다.
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