1. Wound Healing Assay Kit는 어떤 실험에 이용되나요?
CytoSelect™ 24-well Wound Healing Assay Kit는 세포의 이동, 증식, 상처 회복 능력을 측정하기 위해 사용됩니다.
2. 어떤 cell line을 이 assay에 사용할 수 있나요?
모든 adherent cell line에 사용할 수 있습니다.
3. Insert를 다른 plate에 이용해도 되나요?
Insert를 다른 plate에
이용하는 것은 추천하지 않습니다. Wound insert는 해당
kit plate에 맞게 0.9 mm wound gap으로 정밀하게 제작되었습니다. 좋은 wound gap을 얻기 위해서는 monolayer를 형성하는 동안 insert가 plate에 계속 접촉해있어야 하고, plate에 딱 맞아야 합니다. 다른 plate들에서 insert를
이용해봤을 때 깨끗한 wound gap을 형성하지 못하는 것을 확인했습니다.
4. Insert는 재사용 가능한가요?
Insert는 재사용할 수 없고, 오토클레이브에
돌리면 치수가 달라질 수 있습니다. 이는 wound gap 퀄리티에
영향을 줄 수 있습니다.
5. Clean gap을 얻기 위해서는 어떻게 해야 하나요?
Clean wound gap을 만들기 위해서는 monolayer를 형성하는 동안 insert와 24-well plate가 접촉해 있어야 합니다. 이 assay를 사용할 때는 다음과 같이 몇 가지 주의사항이 있습니다.
- 너무 많은 cell을 seeding
하지 않도록 해야 합니다. Wound healing assay를 수행하기 전에, 24-well plate에서 cell dose curve를 수행하여
특정 시간(예: overnight incubation) 내에 monolayer를 형성하는데 필요한 세포 수를 확인할 수 있습니다.
- Cell을 넣은 후, plate 뚜껑을
닫고 뚜껑을 부드럽게 한번 눌러줍니다. 그 후, monolayer가
완전히 형성되기 전에는 건드리지 않습니다. 가능하면 insert를
제거할 준비가 될 때까지 plate를 움직이지 않도록 해야 합니다.
- Media는 insert를
제거한 후에 갈아줘야 합니다.
6. 이 assay에 inverted microscope가 필요한가요?
네, 이 assay에는 inverted microscope이 필요하고, 광학 현미경 또는 DAPI 필터가 있는 형광 현미경을 이용해야 합니다.
7. 이 kit의 결과를 정량화 할 수 있나요?
Percent closure나 migration rate는 광학이나 형광 현미경을 이용하여 결정될 수 있습니다. 제품 설명서에 percent closure 측정 방법에 대한 자세한 설명이 나와있습니다 (pg 6-7). 간단히 설명하면, 상처의 정의된 영역을 측정한 후, 광학 현미경이나 이미징 소프트웨어로 wound closure를 모니터링 해야 합니다. 위상차 현미경, DAPI 형광 라벨링 또는 세포 염색으로 세포를 시각화 할 수 있습니다.
8. 어떤 이미지 분석 소프트웨어를 추천하나요?
NIH Image, Image Pro Plus, 또는 CellProfiler를 추천합니다.
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