특징
- TR-FRET(Time-Resolved Fluorescence Resonance Energy Transfer, 시간 분해 형광 공명 에너지 전달) 및 FP(Fluorescence Polarization, 형광 편광) 분석은 신약개발 및 생물학에서 target engagement (단백질-단백질 상호 작용, 효소 동역학 및 수용체-리간드 결합, Drug-단백질 결합 등) 분석에 널리 사용됩니다.
- TR-FRET 및 FP 분석에서 리간드 결합을 탐색하는 데 적합한 CoraFluor™ terbium cryptate FRET donor와 형광 E3 ligase ligand를 포함한 다양한 형광 프로브를 제공합니다.
- CoraFluor는 PROTAC/TPD 연구에도 유용합니다. Small molecule이 E3
혹은 POI 와 잘 결합하는지 여부 를 확인하거나 E3+Small
molecule+POI의 결합여부 확인에도 사용될 수 있습니다.
주요 제품
Cat. No. |
Product |
Activity |
7857 |
BDY FL Lenalidomide |
Fluorescent
cereblon ligand |
7985 |
BDY FL Staurosporine |
Fluorescent probe targeting kinases;
kinase tracer for TR-FRET assays |
7633 |
BDY FL Thalidomide |
High affinity fluorescent probe for
TR-FRET cereblon binding assay |
7483 |
BDY FL VH032 |
High-affinity VHL fluorescent probe for
TR-FRET and FP assays |
7952 |
CELT-133 |
Selective hα1A adrenergic
receptor fluorescent antagonist; suitable for use in TR-FRET |
7953 |
CELT-211 |
Fluorescent serotonin 5HT2B receptor ligand for HTS; suitable for use in TR-FRET |
7954 |
CELT-327 |
Fluorescent hA2B/A3 adenosine receptor
antagonist; suitable for use in TR-FRET |
7955 |
CELT-426 |
Potent, partially selective and fluorescent hD2 dopamine receptor antagonist; suitable for use in TR-FRET |
7920 |
CoraFluor™ 1, amine reactive |
Terbium cryptate FRET donor for TR-FRET
assay development; amine reactive for conjugation |
8817 |
CoraFluor™ 1, Haloalkane |
Cell impermeable terbium cryptate FRET
donor for TR-FRET assay development, with chloroalkane ligand |
8117 |
CoraFluor™ 1, thiol reactive |
Terbium cryptate FRET donor for TR-FRET
assay development, cysteine reactive for conjugation |
7950 |
CoraFluor™ 2, amine reactive |
Terbium cryptate FRET donor for TR-FRET
assay development; amine reactive for conjugation |
8818 |
CoraFluor™ 2, Haloalkane |
Cell permeable terbium cryptate FRET
donor for TR-FRET assay development, with chloroalkane ligand |
7287 |
FAM-DEALA-Hyp-YIPD |
Fluorescent HIF-1α peptide; can be used
to assess VHL binding in FP assays |
6574 |
Fluorescein-NAD+ |
Fluorescent NAD+;
substrate for ADP-ribosylation for use in PARP assays; wavelengths are
compatible with use as an acceptor dye in TR-FRET assays |
7722 |
JQ1-FITC |
Fluorescent BET bromodomain probe;
suitable for use in TR-FRET |
4577 |
LDV FITC |
Flourescent α4β1 integrin ligand; wavelengths
are compatible with use as an acceptor dye in TR-FRET assays |
8126 |
Mpro Tracer |
TR-FRET acceptor; SARS-CoV-2 main
protease fluorescent ligand |
6461 |
PARPi-FL |
Fluorescent potent PARP inhibitor;
wavelength compatible with use as an acceptor dye in TR-FRET assays |
7970 |
SAHA-FITC |
Fluorescent HDAC1/2 probe; suitable for
use in TR-FRET and FP assays |
7288 |
Thalidomide-Cyanine 5 |
High affinity cereblon fluorescent probe
for use in TR-FRET |
2540 |
Tocrifluor T1117 |
Fluorescent cannabinoid CB1 receptor ligand; wavelength compatible with use as an
acceptor dye in TR-FRET assays |
8069 |
XIAP Tracer mF-Smac |
Fluorescein labeled XIAP ligand for
TR-FRET assay development |
TR-FRET 분석원리
TR-FRET(Time-Resolved Fluorescence Resonance Energy Transfer)는 단백질-단백질 상호 작용, 효소 동역학 및 수용체-리간드 결합을 연구하기 위한 Drug Discovery 및 생물학적 연구 분야에서 널리 사용되는 매우 민감한 분석 기술입니다. 이 기술은 두 개의 형광 분자(donor 및 acceptor) 사이의 에너지 전달을 측정하여 작동합니다. Donor 분자가 일반적으로 340nm의 광원에 의해 여기 상태가 될 때 두 분자가 서로 근접한 경우(일반적으로 5-10nm) Förster 공명 에너지 전달(FRET)이라는 현상을 통해 에너지가 donor에서 acceptor로 전달됩니다. TR-FRET 분석은 일반적으로 큰 Stroke shift와 몇 milisecond 동안 유지되는 lanthanide를 donor로 사용합니다.

그림 1. Schematic outlining the TR-FRET assay principle as applied to induced proximity.
Fluorescence polarization (FP) 분석원리
형광 편광(FP) 분석은 단백질-단백질, 단백질-DNA 및 단백질-리간드 결합과 같은 분자 상호 작용을 연구하고 효소 반응의 진행 상황을 모니터링하는 데 생물학에서 널리 사용됩니다. 이 기술은 형광 프로브에 적용된 편광광의 효과가 분자 구조, 방향 및 크기와 같은 여러 요인에 따라 달라진다는 관찰에 기반합니다. FP 분석은 흡수와 방출 이벤트 사이에 시간에 따른 분자 방향의 변화를 측정하고 형광 분자의 결합 수준을 나타냅니다. 이 접근 방식은 분자 상호 작용에 대한 빠르고 정량적이며 다재다능한 분석을 제공하며 소분자의 친화도 상수(Ki, Kd) 및 IC50 값을 측정하는 데 사용할 수 있습니다. 따라서 FP 분석은 약물 발견에서 고처리량 스크리닝에 자주 사용됩니다.
CoraFluor™ Probe
CoraFluor™ 1 (#7920) 및 CoraFluor™ 2 (#7950)는 FAM 또는 FITC (#5440), BODIPY ® (BDY), Janelia Fluor ® 염료, TMR 및 Cyanine 5와 같이 일반적으로 사용되는 형광 acceptor dye와 호환되는 파장을 방출하는 terbium-based TR-FRET donor로, 이후 진행되는 스크리닝에 쉽게 통합될 수 있습니다. (그림 2)
기존의 TR-FRET donor와 비교하여, CoraFluor 형광은 생물학적 배지에서 더욱 밝고 안정적이므로, 생화학 분석에서 민감성과 데이터 생성을 개선합니다. CoraFluor™ 1은 337nm UV 레이저에 노출 시 excitation을 하는 반면 CoraFluor™ 2는 red-shifted excitation wavelength를 보여 365nm 및 405nm에서 excitation 효율을 향상시킵니다. CoraFluor™ 2의 이러한 특성은 다양한 분석 기기에서 이용할 수 있는 장점이 있습니다.
CoraFluor 시약은 항체나 관심 단백질에 직접적으로 conjugate할 수 있습니다. (프로토콜)

그림 2. CoraFluor emission spectral overlap with common acceptor dyes.
TR-FRET의 용도
TR-FRET은 종양학, 심혈관 질환, 감염성 질환 및 신경 퇴행성 질환을 포함한 다양한 치료 분야에서 새로운 약물 표적을 식별하고, 화합물 라이브러리를 스크리닝하고, 리드 화합물을 최적화하는 데 광범위하게 사용되었습니다. TR-FRET 분석은 다중 웰 플레이트 형식에서 저해제 및 분해제와 같은 소분자의 단백질 표적에 대한 결합 친화도를 측정하는 데 특히 유용하여 표적 결합의 효율적인 고처리량 스크리닝이 가능합니다(그림 3).

그림 3. CoraFluor TR-FRET target engagement assay.
PROTAC과 같은 Degrader 개발에서의 TR-FRET
TR-FRET 3중 복합체 분석은 degrader, 표적 단백질, 유비퀴틴 E3 ligase 간의 상호작용을 정량적으로 측정하기 때문에 소분자 단백질 degrader 개발에 유용합니다(그림 4). 이 정보는 degrader와 표적 단백질의 결합 친화력, 유비퀴틴 E3 ligase의 표적 단백질 모집, 유비퀴틴화와 후속 분해에 필요한 협력적 3중 복합체의 형성을 특성화하여 효과적인 표적 단백질 분해를 달성하는 데 중요합니다. 이를 통해 degrader 분자를 최적화하여 효능과 선택성을 개선할 수 있습니다.

그림 4. CoraFluor TR-FRET ternary complex assay.