GenCrispr sgRNA Screening Kit | 고마바이오텍

특징

• CRISPR 시스템이 작동하려면 Cas9 단백질과 sgRNA가 결합하여 목표 DNA를 정확히 절단해야 합니다. 하지만 설계한 모든 sgRNA가 똑같이 잘 작동하는 것은 아닙니다. GenCRISPR sgRNA Screening Kit는 실제 세포 실험에 들어가기 전, 가장 효율이 좋은 sgRNA를 선별(Screening)할 수 있게 해줍니다.
• GenCRISPR sgRNA Screening Kit는 In-vitro Cleavage Assay(시험관 내 절단 분석) 방식을 사용합니다. 
• 고순도의 Cas9 단백질, 반응 버퍼, 그리고 대조군(Control) DNA/sgRNA 등이 포함되어 있습니다. (사용자는 자신이 설계한 sgRNA와 타겟 DNA만 준비하면 됩니다.)
• DNA가 깨끗하게 두 조각으로 잘렸다면 해당 sgRNA는 효율이 높은 것이고, 잘리지 않았다면 설계가 잘못되었거나 효율이 낮은 것입니다.
• 세포 배양이나 형질전환(Transfection) 같은 복잡하고 비싼 세포 실험을 하기 전에 미리 검증하므로, 실패 확률을 크게 낮춰줍니다.
• 고성능의 GenCrispr Cas9 단백질을 사용하여 실험 결과의 신뢰도가 높습니다.
• 숙련된 연구자가 아니더라도 1~2시간 내에 결과를 확인할 수 있을 만큼 프로토콜이 단순합니다.

• GenCrispr Cas9 Nuclease
• 10X Reaction Buffer
• Positive Control sgRNA
• Positive Control Substrate
• RNase-free water

실험 과정 

1. 시험관 안에 타겟 DNA, sgRNA, Cas9 단백질을 넣고 반응시킵니다.
2. Cas9이 sgRNA의 안내에 따라 DNA를 자릅니다.
3. 전기영동(Agarose gel electrophoresis)을 통해 DNA가 계획대로 잘렸는지 확인합니다.

데이터

gRNA efficiency screening using GenCRISPR sgRNA screening kit.

Twelve unique synthesized gRNAs were incubated with Cas9 nuclease for 1 h at 37°C according to the instructions in theGenCRISPR sgRNA screening kit manual. 

Upon separating the reactions by agarose gel electrophoresis, only gRNA9 was observed to induce cleavage.