CRISPR Cas9 Nuclease | 고마바이오텍

GenCRISPR™ Nuclease   

1) Cas9 

• Cas9 Nuclease는 E. coli에서 정제된 재조합 Streptococcus pyogenes Cas9 (wt) 단백질로, dsDNA에서 부위 특이적인 이중가닥 파손을 유도하는 강력한 유전자 편집 도구입니다.  
• Cas9 단백질은 CRISPR/Cas9 시스템의 guide RNA와 매우 안정적인 RNP (ribonucleoprotein) complex를 형성합니다.
• RNP complex는 gRNA를 genomic DNA sequence와 매칭시켜 타겟 사이트를 인식하고 NGG PAM으로부터 3개 염기 내에서 DNA break를 유도합니다. 

2) Cas12a 

• Cas9 시스템과 달리 CRISPR/Cpf1 시스템은 크기가 더 작고 추가 trans-activating crRNA (tracrRNA)가 필요하지 않습니다. 
• Cas9 시스템이 G-rich PAM을 필요로 하는 반면, Cas12a 시스템은 짧은 T-rich PAM에 의해 표적 DNA를 절단합니다. 
• 4 또는 5-nt 5' overhang이 있는 엇갈린 (staggered) DNA 이중 가닥을 파손시킵니다. 
• BV3L6 Cas12a (cpf1) nuclease는 E.coli에서 발현 및 정제되며 C-말단에 핵 국소화 서열 (nuclear localization sequence, NLS)를 포함하고 6x His-tag을 포함합니다. 

3) Cas13a 

• GenCRISPR Cas13a (C2c2) Nuclease는 RNA유도, RNA표적화 CRISPR 효소로, VI 타입 CRISPR 제품군에 속합니다.
• Cas13a는 두가지 RNase 활성을 나타냅니다. (cis-sequence specific RNA guided cleavage, non-specific trans-ribonuclease activity)
• Cas13a 단백질은 높은 특이성이 입증된 단일 RNA 분자를 검출하는데 적용됩니다. 

GMP grade GenCRISPR™ Nuclease  

• ISO 13485와 GMP  품질경영시스템 기준에 따라 제작된 CRISPR gene editing용 wide type & mutant type Cas9 enzyme 
• Regulatory Documentation 제공  
• 세포, 유전자, 조직을 이용한 치료제 개발시 보조 물질로 사용될 수 있음.  
  - USP <1043>. Ancillary materials for Cell, Gene and Tissue-engineered products.
  - ICH Q7 Good Manufacturing Practice Guide for Active Pharmaceutical Ingredients
  - NMPA: Technical guidelines for pharmaceutical research and evaluation of immune cell therapy products
  - Guideline and procedure specified in Chinese Pharmacopeia.