사멸균의 DNA 제거를 위한 PREraser Kit | 고마바이오텍

특징 

• PREraser를 이용하여 식품 및 환경 샘플에서, 살아있는 병원체 오염과 죽은 병원체 오염을 구별할 수 있습니다. 
  
• 식중독 등 식품매개 병원체 검출을 위한 PCR 실험시, 사멸균으로부터 유리된 free DNA는 위양성 결과를 초래할 수 있습니다. PREraser는 이러한 사멸균의 DNA를 효소로 분해시켜 제거함으로써 free DNA에 의한 위양성 PCR 신호를 2-3 log (>5Cq's) 감소시켜 줍니다. 따라서 살아있는 균의 DNA만 PCR 증폭에 이용되어 정확한 결과를 얻을 수 있습니다. 
• PMA (propidium monoazide) 나 EMA (ethidium monoazide) 방법에 비해 사용이 쉽습니다. 
  
• Eurofins Technologies의 킷트에 적용하여 AOAC 승인을 받은 method 입니다. (#는 AOAC 승인번호입니다.)
  •   BACGene Listeria Multiplex (#061701)
  •   BACGene Listeria spp. (#061702)
  •   BACGene Listeria monocytogenes (#061703)
  •   BACGene Salmonella spp. (#121501)

실험 과정  

• Sampling & Enrichment   →  PREraser 처리  →  Lysis  →  PCR

1. BACGene kit 메뉴얼에 따라 샘플을 농축한다.
2. 두개의 Heating block을 각각 37도와 95도로 셋팅한다.
3. 필요한 양의 PREraser BACGene working solution을 준비한다.
4. 3번용액을 손가락으로 가볍게 튕기고 spin down 한다.
5. 10ul의 PREraser working solution을 8-tube strip이나 plate에 넣는다.
6. 100ul의 샘플을 넣는다.
7. 100ul의 negative enrichment control이나 nuclease free water로 negative control을 준비한다.
8. domed cap으로 well을 닫는다.
9. Vortexing을 3-5회 정도 진행하거나 파이펫으로 3회 정도 up and down을 하여 homogenization 한다.
10.  plate나 strip을 원심분리기에 넣고 30초간 400-2000g에서 spin down 한다.
11.  plate나 strip을 heating block에 넣고 37도에서 30분간 인큐베이션 한다.
12.  plate나 strip을 95도에서 10분간 heating block에 놓음으로써 PREraser 용액을 inactivation 시킨다. 
13.  plate나 strip을 실온이나 cooling block에서 식힌다. 
14.  PREraser가 처리된 샘플을 lysis buffer가 처리된 plate에 넣는다.
15.  lysis를 진행한 뒤 BACGene kit 메뉴얼에 따라 PCR을 진행한다.