인간 간세포모델 | Undifferentiated HepaRG Cell & Medium | 고마바이오텍

특징

• HepaRG는 다음 4가지 특성을 가지는 immortalized cell line입니다.
• Phase I, Phase II, Primary human hepatocypte(PHH)의 transporter 활동과 온전한 반응 요소 PXR, CAR, PPARa 등  PHH의 기능, 반응, 조절 경로를 가집니다.
• 모세 담관(bile canaliculus)를 형성합니다.
• 줄기 세포의 주요 특성을 발현할 가능성이 있습니다.
• 높은 가소성 및 완전한 전환 분화 능력(transdifferentiation capacity)를 가집니다.
• HepaRG는 in vitro ADME, in vitro toxicity testing, liver assist device/BioArtificial Livers, Transgenic Liver humanized animal 등에 사용할 수 있습니다.
• 6,12,24,48,96-well plate과 25,75 cm² flask에서 세포를 배양할 수 있습니다.
• HPR 101은 P12 계대인 미분화 HepaRG cell을 제공합니다. 
• 최대 P19까지 계대 배양하여 세포수를 증식할 수도 있고 hepatocytes-like cell로 분화하여 사용할 수 있습니다.

장점

• 사용자의 편의에 따라 세포를 다양하게 사용할 수 있습니다.
• 각 계대마다 동일한 분화 과정을 거칩니다.
• 세포 배양은 7-8 계대를 진행하고 사용할 수 있습니다.
• 안정적인 유전자 전달에 잘 적응하여 장기간 진행되는 연구에 적합합니다.

미분화 HepaRG와 전용 Media

HepaRG 분화과정 

• HepaRG 분화 과정은 Proliferation stage와 Differentiation stage로 구분할 수 있습니다. 
  (1) Proliferation stage : 증식 단계 동안 cell doubling 시간은 24시간 입니다. 14일 째에 세포는 최고 confluence에 도달하고 이 순간에 세포는 증식단계나 분화단계로 split 될 수 있습니다. 
  (2) Differentiation stage : 간 분화를 거치기 위해 세포를 14일 동안 1.7% DMSO로 보충된 농축배지로 이동합니다. 3-4일 이내에 두개의 독특한 세포 집단이 확인되는데, 하나는 hepatocyte colony이고 다른 하나는 primitive biliary cell입니다. 일단 완전히 분화되면 간세포 유사세포는 1차 인간 간세포의 모든 기능, 반응, 조절 경로를 발현하게 됩니다. 

참고 데이터

그림 1. HPR101(Undifferentiated HepaRG)의 passage 14 형태. 2주간 HepaRG Growth Medium(MIL700C+ADD710)을 처리하고 2주간 HepaRG Differentiation Medium(MIL700C+ADD720)을 처리한 결과. 세포의 50%는 밝은 canaliculi 유사 구조를 형성한 일반적인 hepatocyte-like cell을 보여줌. 

사용 방법 

1. Cell Thawing 

2.  Cell viability measurement and counting 

3.  Cell seeding