ADME/DMPK 분석서비스 | In vitro ADME Assays | 고마바이오텍

• 세포막을 가로지르는 화합물의 투과성은 흡수의 속도와 정도를 결정하고 궁극적으로 후보약물의 생체 이용률에 영향을 미치는 중요한 특성입니다.
• 막투과성이 좋지 않은 화합물은 생체 내에서도 좋지 않을 가능성이 높습니다. 
• Eurofins Discovery의 Absorption & Permeability Assay는 PAMPA 및 인간 Caco-2와 dog MDCK 세포를 포함한 여러 세포주에서 표준 및 맞춤형 양방향 투과성 분석을 제공하며, 화학물의 생체 내 경구 흡수에 대한 정확한 예측을 위해 포괄적인 in vitro permeability service를 제공합니다. 

Partition Coefficient Assay 

 

• 물 또는 완충액과 n-octanol사이의 분배 계수는 약물의 친유성을 측정하는 척도입니다.
• Eurofins Discovery의 Partition Coefficient Assay Service는 Shake-flask 기법과 HPLC-UV 분석을 통해 약물의 친유성을 측정해 드립니다. 

Blood Partitioning Assay

• 약물의 적혈구로의 분배를 이해하는 것은 약물의 약동학 (Pharmacokinetics / PK)를 해석하고 이해하는데 중요합니다.
• 또한 높은 분배 비율은 적혈구에 약물이 축적되고 잠재적인 혈액독성을 나타낼 수 있음을 예측할 수 있습니다.
• Eurofins Discovery의 Blood Partitioning Assay Service는 약물을 전혈에 처리하여 인큐베이션하여 약물의 plasma 대 reference plasma내의 양을 LC-MS로 분석함으로써 RBC 대 혈장비율 (KRBC/PL)을 측정합니다.

Metabolic Stability Assay

• 전망이 예상되는 약리학적 특성을 가진 약물일지라도 대사 안정성 profile이 좋지 않으면 치료제로 이용될수 없습니다. 예를 들어, 빠르게 대사되는 약물은 생체내 노출수준이 부족하여 충분한 효과를 내지 못하기도 하고, 천천히 대사되는 약물은 장기간 체내에 남아 원치않는 부작용을 유발할 수 있습니다. 
• 화합물이 체내에서 생체 변형을 겪을 가능성을 이해하는 것은 효과적인 후보 약물을 선택하는데 중요합니다. 
• Eurofins Discovery의 Metabolic Stability Assay Service는 생체 이용률 및 반감기 (t1/2)와 같은 기타 주요 약동학적 매개변수를 계산하는데 필요한 화합물의 고유 clearnace를 측정합니다. 신체의 다양한 기관에서 화합물의 안정성에 대한 정확한 예측을 제공하기 위해 동물 및 인간 유래의 간 microsome, hepatocyte, S9 fraction, blood, plasma, recombinant enzyme을 이용하여 in vitro test를 제공합니다. 

CYP Inhibition and Phenotyping Assays

• 약물대사는 약물을 친수성으로 만들어 배출을 용이하게 하기 위한 과정으로 간에서 대부분 발생하며, Phase I metabolism (Cytochrome P450)과 Phase II metabolism (GST, UGT) 대사 효소에 의해 이루어집니다.
• Phase I 대사는 CYP enzyme에 의해 산화, 환원, 가수분해가 진행되는 과정이며, Phase II 대사는 conjugation 반응을 생성하는 것으로, 화합물에 특정 분자 구조를 더해줌으로써 친수성을 증가시킵니다.  
• Eurofins Discovery의 CYP inhibition assay는 human liver microsome 또는 형광 substrate를 이용하여 주요 CYP 효소 억제에 대한 테스트를 제공하고, 다양한 in vitro assay를 통해 약물 발견의 초기 단계에서 CYP 효소의약물 매개 억제를 평가할 수 있는 가능성을 제공합니다. 
• CYP phenotyping은 96well plate 상에서 CYP isozyme을 사용하여 약물의 안정성을 측정합니다.    

Reversible and time-dependent CYP 3A4 inhibition. For reversible inhibition of CYP3A4, drug probe substrates or fluorometric substrates were incubated in the presence of increasing concentrations of a known CYP 3A4 inhibitor, ketoconazole, in either recombinant CYP 3A4 (fluorometric substrates) or human liver microsomes (drug probe substrates). IC50’s were generated by measuring percent inhibition of fluorescent products (flurometric substrates) or formation of metabolites by HPLC-MS/MS (drug probes substrates). For time-dependent inhibition of CYP 3A4, IC50’s were generated in the presence or absence of NADPH.

CYP Induction and Nuclear Receptor Assays 

• 약물-약물 상호작용(Drug-drug interactions, DDI)은 약물을 음식, 음료, 다른 약물과 동시에 투여했을때 일어나는 약물의 작용이나 부작용의 변화입니다. 
• 이는 약물이 작용하는 타겟에서 약물의 작용을 증가시키거나 감소시켜 부작용이나 독성, 혹은 치료제 효과 감소를 유도합니다. 
• 일반적으로 주요 핵 수용체 PXR, CAR 및 AhR의 활성화를 통해 CYP450의 발현과 활성을 유도하는 약물은 다른 병용 투어 약물의 대사를 극적으로 변화시킬수 있으며, 이는 종종 빠른 대사 및 약물 혈장농도를 낮추고 효과를 감소시킵니다.
• Eurofins Discovery에서는 FDA 및 EMA 지침에 따라 3A4, 2B6, 1A2, 2C8, 2C9 및 2C19에 대한 CYP 유도 분석을 제공합니다. 실시간 qPCR (mRNA 분석) 또는 효소 활성을 측정하는 전통적인 방법을 통해 유전자 발현 수준을 측정하여 수행할 수 있으며, human 및 animal 유래 hepatocyte에서 CYP 유도 분석을 진행합니다.