1. TBARS assay와 MDA ELISA kit중 어떤 방법이 더 민감한가요?
MDA Adduct Competitive ELISA Kit가
TBARS assay에 비해 민감도는 더 뛰어나지만, 두 분석법은 직접적으로 비교할 수는
없습니다. MDA ELISA는 좀 더 특이적이고 MDA 단백질
부가 생성물만을 측정하지만 TBARS는 free MDA와 MDA 부가생성물을 포함하는 전체 MDA를 측정하여, MDA adduct ELISA에 비해 더 높은 값을
줍니다. 시료에 헤모글로빈 양이 높다면, TBARS 분석에 방해를 줄수 있으므로 ELISA 방법을 사용하는 것을 권장합니다.
2. 뷰탄올(butanol) 추출은 왜 하는 건가요?
시료내에 헤모글로빈이 많으면 MDA-TBA 흡광도인 532nm와 매우 가까운 540nm에서 강한 위양성을 보일 수 있기 때문에 Butanol extraction은 헤모글로빈을 제거하기 위해 선택적으로 사용되는 과정입니다. 이 과정을 수행하면 MDA-TBA adduct에 의한 색상만 측정됩니다.
3. 뷰탄올 추출 과정은 꼭 필요한가요?
아니요. Butanol 추출과정은 선택적
과정으로 hemoglobin 수치가 높은 serum 등의 샘플을 사용할 때만추가적으로 시행합니다.
4. Vortexing을 하면 뷰탄올은 어느 위치에서 확인되나요?
뷰탄올은 vortexing후 upper phase에 위치하며 MDA-TBA를 포함합니다. 헤모글로빈은 lower buffer층에 위치합니다.
5. Kit 메뉴얼에서는 한달 이내의
샘플을 사용하도록 권장하고 있는데, 이유가 있나요?
MDA는 매우 불안정하기 때문에 영하 80도에서 1개월 이상이 되면 분해가 시작되기 때문입니다. 또한, 오래된 샘플에서 MDA를 측정하는 것이 더 어려울 수 있습니다,
6. 영하 80도에서 1년 이상 보관된 샘플로도 TBARS 분석이 가능한가요?
영하 80도에서 1년 이상 보관된 샘플을 사용하려 한다면, DNA내의 8-OHdG나 단백질 카르보닐 등 다른 마커를
측정하는 방법을 이용하는 것이 좋습니다.
7. 샘플에 BHT를 추가하는 것은 꼭 필요한가요?
BHT는 분석하는 동안 추가적으로 산화되는 것을 방지하는 항산화제이므로, 가급적 사용하는 것이 좋습니다.
8. 간조직 샘플에도 TBARS 분석을 이용할 수 있나요?
간 조직은 TBARS assay에 사용할
수 있지만, 분석에 방해를 줄 수 있는 적혈구를 많이 가지고 있으므로, perfusion과 뷰탄올 추출
과정을 모두 진행하여, 540nm에서 강한 흡광도를 가지는 헤모글로빈에 의한 위양성을 제거해야 합니다.
9. 안토시아닌을 함유하는 식물 샘플에도 이용할 수 있나요?
식물로 TBARS assay를 테스트 해 보지는 않았으나, TBARS assay를 식물 시료에서 진행한 문헌은 많이 있기 때문에 가능할 것으로 생각됩니다. 뷰탄올 추출은 꼭 진행하여 물층에 존재하는 안토시아닌을 제거해야 합니다.
10. TBARS 분석을 위한 serum 이나 plasma 샘플은 어떻게 채취하는 것이 좋을까요?
TBARS assay를 위한 특별한 blood 샘플 채취 프로토콜은
없으나, 대부분의 항응고제를 사용해도 괜찮습니다. MDA는
불안정하므로 샘플은 수집 후 바로 사용해야 하며, 샘플은 영하 80도에서
1-2달 정도만 보관할 수 있습니다.
11. TBARS Assay는 species에 따라 사용가능 여부가 달라지나요?
TBARS Assay는 종특이적이지 않으므로, 모든 종의 샘플에 사용할 수 있습니다.
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