1. FBS란 무엇입니까?
FBS (Fetal Bovine Serum)란 소태아혈청으로써, 세포 성장에 필수적인 growth factor, cytokine, protein들이 다양하게 포함되어 있습니다. 일반적으로 배지의 첨가제로 사용되며, 세포 성장, 세포 부착, 확산과 관련된 factor를 제공합니다.
2. FBS의 보관 및 사용 기간은 어느 정도 입니까?
FBS는 빛을 차단한 상태로 -5°C에서 -20°C사이에서 냉동 보관합니다. 해동할 때에는 실온에서 37°C사이의 water bath에서 해동합니다. 완전히 해동이 되면 재빨리 water bath에서 옮겨줍니다. 또한 사용량에 맞춰 분주하여 보관하시면 해동이 편리하며, 반복적인 해동-냉동을 피할 수 있습니다. 한번 녹인 FBS는 바로 사용이 가능하며, 2-8°C에서 4주 정도 보관이 가능하나 침전물 발생 가능성이 있으므로 되도록 해동 후 바로 사용할 것을 권장합니다. 보관, 해동 및 냉동에 대한 한글 매뉴얼을 원하시면 언제든 고마에 문의하세요.
3. Heat Inactivation 과정은 무엇이며, 사용 전 꼭 진행해야 하나요?
Heat inactivation 과정이란 혈청 속의 Complement protein이나 Mycoplasma를 제거하는 과정입니다. 그러나 이 과정 동안 다른 유용한 amino acid, vitamins, growth factor들도 파괴될 수 있습니다.
Low endotoxin 제품을 사용할 경우 Heart inactivation 과정은 필요하지 않습니다. 단, 면역학 실험을 위한 세포(Stem cell, Insect Cell)에 대해서는 Heat Inactivation을 진행하는 경우도 있습니다.
4. Heat Inactivation은 어떻게 하면 되나요?
필요한 수의 병이 충분히 들어갈 수 있는 Water bath를 56°C로 예열합니다. FBS를 해동한 뒤, 56°C의 water bath에 30분 동안 둡니다. Heat inactivation이 진행되는 동안 5분마다 병을 저어줍니다. 30분이 지나면 병을 water bath에서 ice bath로 옮겨 heat inactivation을 완성합니다.
5. FBS를 테스트하는 방법으로 어떤 게 있을까요?
FBS를 테스트하는데에 정해진 방법은 없지만, 일반적인 방법은 다음과 같습니다. 테스트하고자 하는 FBS가 포함된 배지와 control FBS가 포함된 배지에 각각 10 cells/well, 100 cells/well, 1,000 cells/well로 세포를 seeding 합니다. 배지를 교체하지 않고 두 배지 사이의 차이점을 12~24시간 단위로 관찰합니다. FBS 상태에 따라 세포의 성장속도, morphology 등에 차이가 발생하게 됩니다.
6. Fetal Bovine Serum(FBS)와 Fetal Calf Serum(FCS)의 차이점은 무엇인가요?
차이는 없습니다. 동일한 제품에 대한 다른 이름일 뿐입니다.
7. FBS를 해동 후 사용하려 하니 부유물이 생성되었습니다. 세포 생장에 안전한가요? 이 부유물을 제거하기 위해 필터를 사용해도 괜찮을까요?
FBS를 사용할 때 일반적으로 생기는 부유물은 세포의 기능에 영향을 미치지 않습니다. 그리고 부유물을 제거하기 위해 필터를 사용하는 것은 권장하지 않습니다.
8. 부유물이 생성되는 원인은 무엇인가요?
FBS를 냉동과 해동을 반복하거나 heat inactivation을 한 경우, FBS는 뿌옇게 변하거나 부유물 또는 결정이 생깁니다. R&D Systems에서는 serum을 수집하고 빠르게 낮은 온도로 얼려, 성장에 도움을 주는 고품질의 세럼을 만듭니다. 하지만 이 과정에서 용해성 피브리노겐이 남을 수 있습니다. 피브리노겐은 해동 과정에서 불용성인 피브린으로 변할 수 있습니다. 또, 결정은 종종 세럼 성분과 단백질의 칼슘 복합물이기도 하며, 지질 성분이기도 합니다.
9. 부유물이 생성되는 것을 줄이기 위해서는 어떻게 해야 하나요?
부유물이 생성되는 것을 줄이기 위해서는 불필요한 냉동-해동 과정을 줄이고 필요한 용량만큼 분주하는 것이 좋습니다. 또한, heat inactivation도 결정이 생기는 원인이 되므로, 불필요한 heat inactivation은 지양하는 것이 좋습니다. 해동을 할 때에도 완전히 해동이 되면 water bath에서 옮겨주는 것이 좋습니다.
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