1. 단백질 프리캐스트 젤에는 어떤 종류가 있나요?
일반적으로 사용하는 Tris-Glycine 타입의 gel외에도, 30-40분안에 신속하게 전개할 수 있는 FASTG Gel, 작은 사이즈의 단백질을 분리할 수 있는 Tricine Gel, 등전점에 의해 분리하는 IEF Gel, 유효기간이 1년으로 장기 보관이 가능한 EzWay Gel, 젤라틴을 기질로 하는 protease를 분리하는 데에 이용하는 Zymogram Gel이 있습니다.
2. EzWay Gel과 Tris-Glycine Gel의 차이는 무엇인가요?
EzWay Gel은 gel의 pH를 중성으로 맞추어 hydrolysis를 최소화하여 장기간동안 보관할 수 있도록 제작된 젤입니다. wide range로 분리할 수 있으며, 특히 3가지의 buffer system을 통해서 low, medium, large 사이즈의 단백질 밴드를 좀더 자세히 분리할 수 있습니다. Tri-Glycine Gel은 일반적으로 많이 사용되는 젤로, SDS가 처리된 젤과 SDS가 포함되지 않은 젤을 선택하실 수 있습니다.
3. LABIS KOMA의 Precast gel과 함께 사용할 수 있는 전기영동 장치는 무엇인가요?
고마 EzCell 장치외에도 Thermo의 Xcell I, II, Surelock, Hoefer(SE260) 장치에 이용할 수 있습니다. Bio-Rad 장치를 갖고 계실 경우에는 BC-Type gel을 이용하시면 됩니다.
4. 예상보다 gel 런닝시간이 오래 걸릴 경우 이유가 무엇인가요?
Running buffer가 너무 희석되어서 그럴수 있습니다. Buffer를 새로 만들고, acid나 base로 1X running buffer의 pH를 조정하지 않도록 합니다.
5. 밴드가 U자 형태로 휘어서 런닝되는 경우 이유가 무엇인가요?
젤이 너무 높은 전류로 런닝이 되어서 그렇습니다. Buffer의 농도가 높거나 젤의 유효기간이 지났는지도 확인하세요.
6. Gel에서 streaking이 생기는 경우 이유가 무엇인가요?
많은 양의 단백질이 로딩되었거나 샘플 내 염농도가 너무 높은 경우 발생할 수 있습니다. 샘플을 희석하고 샘플 내에 있을지도 모르는 particle들을 제거하세요. 필요 시, SDS 농도를 증가시킬수도 있습니다. 염농도를 확인하시고 dialysis나 desalting column을 이용하여 염농도를 줄여주세요.
7. 샘플과 marker가 런닝되지 않을때 어떻게 해야하나요?
카세트에서 테잎이 제거되었는지 확인하시고, buffer가 well까지 충분히 채워졌는지 확인하세요. 또한 power supply와 연결이 잘 되었는지, 카세트나 젤 장치가 잘 장착되어 있는지 확인하세요.
8. Gel 중간에 기포구멍이 생기거나 comb과 well 사이에 간격이 생길 경우 원인이 무엇인가요?
gel 배송이나 보관 중에 동결이 발생하였다가 다시 녹으면서 젤이 수축되어 나타나는 현상입니다. 냉장고 보관 시 냉기가 나오는 입구나 냉기가 지나는 벽면을 피해서 보관해 주세요.
9. Gel running 시 샘플이 lane의 구별 없이 동일하게 전개되거나 염색 시 단백질 밴드가 보이지 않을 경우 원인이 무엇인가요?
샘플 로딩 시 샘플의 부피가 well의 허용 용량을 초과하거나 샘플의 단백질 양이 너무 많은 경우 발생합니다. Gel 매뉴얼 5쪽의 well당 샘플 부피 가이드를 참고하세요. 단백질의 양이 너무 많은 경우 오히려 염색이 되지 않는 현상이 발생하기도 하니 샘플 로딩 양을 줄여주세요.
10. Gel running 후 gel에 기포 구멍이 생길 경우 원인이 무엇인가요?
전기영동 시 너무 과전압에 장시간 노출되어 열에 의한 변형으로 나타나는 현상입니다. Buffer의 조성이 맞지 않거나 변성되지 않았는지, 너무 장시간 running하였는지 확인하세요.
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