1. AAV (Adeno-Associated Virus)의 특징은 무엇인가요?
AAV는 병원성이 없고 면역원성이 낮아서 in vivo 사용에 적합하고 유전자치료제로 사용될 수 있습니다. 특히 특정 조직/기관에 specific하게 유전자의 발현을 유도할 수 있습니다.
2. Adenovirus와의 차이점은 무엇인가요?
아데노바이러스는 Adenoviridae에 속하는 dsDNA 바이러스이고, AAV는 Parvoviridae에 속하는 ssDNA입니다. 둘다 in vivo 실험에 적합하지만, 실험용도의 측면에서 가장 큰 차이점은 유전자 발현기간입니다. 아데노바이러스는 2-3일 정도 transient expression을 유도하는 반면, AAV는 수 개월에서 최대 1년까지 stable expression이 가능합니다.
3. in vivo에서 발현하는 AAV는 언제 확인할 수 있나요?
in vivo 발현 확인이 가능한 시기는 바이러스 투여 후 최소 1-2주 이내에서 10주정도까지 실험조건에 따라 큰 차이가 있습니다.
4. in vitro에서 발현하는 AAV는 언제 확인할 수 있나요?
infection 후 24시간 부터 관찰이 가능하나, 투여 후 2-3일 정도에 발현을 평가합니다.
5. 실험에 필요한 Vector의 양은 얼마나 되나요?
In vitro 실험에 필요한 벡터의 양은 각각의 세포에 맞는 infection titer에 의하여 결정됩니다. 293 Cell의 경우, 5000GC/cell은 90 %이상의 titer를 보입니다. 따라서 AAV의 1e11 GC는 이천만 개의 세포를 감염 할 수 있습니다. In vivo실험에 필요한 벡터의 양은 진행될 실험에 따라 달라집니다. 일반적으로 정맥주사를 통하여 쥐에 AAV를 투여할 경우, 체중 1 kg 당 1e12 GC의 AAV가 사용됩니다. 25g의 쥐를 사용할 경우 1e12 GC AAV로 40마리의 쥐에 주사가 가능합니다.
6. AAV는 어떻게 보관해야 하나요?
-80'C/-20'C 에서 24개월까지 보관이 가능하며, 4'C에서는 약 2주정도 보관이 가능합니다.
반복된 freezing/thawing을 피하기 위해 최초 해동 시 적당량을 분주하여 보관합니다.
조성이 다른 버퍼에 희석한 후 다시 얼리는 것은 바람직하지 않습니다.
7. Serum이 포함 된 배지를 사용해도 되나요?
In vitro 실험에서 FBS(Fetal bovine serum)와 Calf serum은 AAV infection에 영향을 미치지 않습니다. 사람의 44%가 AAV의 항체를 가지고 있습니다. 그러므로 Human serum을 사용해야 하는 경우, neutralizing antibody의 titer test를 진행하는 것이 좋습니다.
8. 정맥주사를 통해 들어간 AAV는 어디로 이동하게 되나요?
Serotype, 투여량, 투여경로, 시간에 따라 차이가 있습니다. 꼬리정맥을 통해 주입 된 AAV2는 주로 폐, 간에서 탐지가 가능합니다. 폐와 간 이외의 다른 장기에서도 검출이 되지만 상대적으로 미미한 양입니다.
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