단백질 분리 | DADPS Biotin Azide | 고마바이오텍

특징

DADPS Biotin Azide는 복잡한 생체 시료(세포, 단백질 등) 속에서 내가 원하는 특정 단백질/세포만 선택적으로 포집하고, 손상 없이 순수하게 다시 분리/회수 사용하는 시약입니다.

기존 바이오틴 시약은 결합이 너무 강해서 단백질을 떼어낼 때 열을 가하거나 가혹한 화학물질을 써야 해 단백질이 파괴되는 단점이 있었습니다. 하지만 이 제품은 중간에 DADPS 링커가 있어 약한 산성 조건(10% Formic acid 등)만 조성해주면 링커만 절단되어 원래의 단백질 형태/기능을 손상시키지 않고 안전하게 회수할 수 있습니다. 

• 제품에 달린 Azide 그룹을 이용해, 표적 단백질/분자에 이 시약을 붙입니다 (클릭 화학 반응)
• 시약 끝의 Biotin 부분이 Streptavidin Bead와 아주 강하게 결합하므로, 혼잡한 세포 추출물 속에서 내가 원하는 단백질만 선택적으로 추출할 수 있습니다.

주요 활용 분야  

• 단백질체학 (Proteomics): 특정 단백질을 분리하여 질량분석기(LC-MS/MS)로 분석할 때
• 표적 단백질 정제: 세포 내 특정 분자나 표적 약물 단백질만 선택적으로 농축/정제할 때
• 신약 개발 연구: 약물이 세포 내의 어떤 단백질과 결합하는지(Target Identification) 추적할 때

사양 

분리 과정

1. 클릭 화학 반응 (Labeling):표적 단백질에 시약 결합하기

분리하려는 목표 단백질에 알킨(Alkyne) 그룹이 노출되도록 화학적/생물학적으로 표지(Tagging)해 둡니다.

세포 추출물(Lysis)을 준비한 뒤 DADPS Biotin Azide를 추가합니다.

구리 촉매 반응(CuAAC)이나 촉매 없는 구리-프리 반응(SPAAC) 같은 클릭 화학 반응을 통해 Azide와 Alkyne을 결합시킵니다.

결과: 목표 단백질 끝에 [DADPS 링커 - Biotin] 태그가 단단하게 달립니다.

2. Biotin-Streptavidin Capture

반응이 끝난 혼합물에 Streptavidin Magnetic Beads를 넣고 섞어줍니다. 

Biotin은 Streptavidin과 가장 강력한 비분쇄성 결합을 형성합니다.

자석(Magnetic stand)을 대어 비드를 끌어당기면, 목표 단백질만 자석에 끌려오고 나머지 필요 없는 수천 가지 세포 잡단백질은 워싱 버퍼(Washing Buffer)로 전부 씻겨 나갑니다.

3. 10% Formic acid를 이용하여 링커 절단 (Cleavage / Release)

[이 제품만의 핵심 장점] 기존 바이오틴 제품은 스트렙타비딘과의 결합이 너무 강해서 단백질을 떼어낼 때 boiling(열 가하기)이나 강한 SDS 버퍼를 써야 했고, 이 과정에서 단백질 변성이 일어났습니다.

비드에 10% 폼산Formic acid와 같은 약한 산성 용액을 짧은 시간 처치합니다. 중간의 DADPS 링커만 선택적으로 끊어지면서, 목표 단백질이 비드로부터 온전하게 Elution 됩니다.

4. 동결건조 및 샘플 분석 (Analysis)

방출된 단백질 용액 속의 폼산을 진공 건조기(SpeedVac) 등으로 날려 보내고 필요한 버퍼로 재부유합니다.

이제 손상되지 않은 순수한 목표 단백질을 질량분석기(LC-MS/MS), Western Blot, 또는 기능성 실효 분석에 바로 사용할 수 있습니다.