[FAQ] 아노이키스 분석 키트 (Anoikis Assays)는 어떤 용도로 사용되나요?

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[FAQ] 아노이키스 분석 키트 (Anoikis Assays)는 어떤 용도로 사용되나요?

Maker : CELL BIOLABS

아노이키스 분석 키트 (Anoikis Assays)에 대한 자주 묻는 질문과 답입니다.

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1. 아노이키스 분석 키트 (Anoikis Assays)는 어떤 용도로 사용되나요?

아노이키스 키트는 세포가 바닥(ECM)에서 떨어질 때 죽는 현상(아노이키스)을 특수 플레이트와 시약(MTT, Calcein AM, EthD-1)을 이용해 살아있는 세포와 죽은 세포를 현미경 및 장비로 정확히 구별, 측정해 주는 Kit입니다.

2. 아노이키스 분석 키트에 포함된 플레이트를 재사용할 수 있나요?

아노이키스 분석 키트는 세포가 붙지 못하게 하는 하이드로겔(hydrogel) 코팅 플레이트를 사용하여 아노이키스 세포 사멸을 유도합니다. 실험 프로토콜을 진행하는 동안 플레이트 표면의 하이드로겔 무결성(상태)이 유지되지 않을 수 있으므로, 사용했던 well을 재사용하는 것은 권장하지 않습니다.

다만, 플레이트 전체를 한 번에 다 쓸 필요는 없으며 여러 번의 실험에 나누어 사용할 수 있습니다. 플레이트를 여러 실험에 나누어 사용할 계획이라면, 덮개를 덮은 상태로 4°C에 보관해야 합니다. 또한 사용 전에는 Cell culture hood 안에서 플레이트를 UV(자외선)등에 30분간 노출시켜 사용하지 않은 well을 멸균한 후 사용할 것을 권장합니다.

3. 사용하지 않은 well을 나중에 쓰기 위해 보관해도 되나요?

아노이키스 분석에 사용되는 24웰 플레이트는 한 번에 모두 사용할 필요가 없습니다. 플레이트를 여러 실험에 나누어 사용할 계획이라면 덮개를 덮어 4°C에 보관할 수 있으며, 사용하기 전에 세포 배양 후드에서 30분간 UV를 쬐어 사용하지 않은 well을 멸균한 후 사용할 것을 권장합니다.

4. MTT와 Calcein AM은 어떤 원리로 작동하나요?

MTT는 세포 증식 분석에 사용되며, 살아있는 세포 내 효소가 tetrazolium 염료(노란색)를 formzan(보라색)으로 환원시키는 활성도를 측정합니다. Calcein AM 역시 살아있는 세포의 지표로 사용되는데, 세포 내로 들어가면 세포 내 esterase (에스테르 가수분해효소)에 의해 분해되면서 녹색 형광을 띠는 calcein으로 전환됩니다. 보유하고 있는 Plate reader 장비의 종류에 따라 MTT나 Calcein AM 중 하나를 선택하여 세포 생존율을 측정하시면 됩니다.

5. 이 키트는 일반적인 세포 사멸(Apoptosis)과 아노이키스(Anoikis)로 인해 죽은 세포를 구별해 주나요?

아노이키스는 세포가 세포외기질(ECM)에 제대로 부착되지 못해 유도되는 세포 사멸(Apoptosis)의 한 형태입니다. 저희 아노이키스 분석 키트는 EthD-1 염색약을 사용하여 세포 사멸을 측정하는데, 이 염색약 자체가 아노이키스나 세포 사멸을 특정해서 구별해 주지는 않습니다.

하지만 이 분석법은 세포가 붙을 수 없는 하이드로겔 코팅 플레이트를 사용하여 아노이키스 세포 사멸을 인위적으로 유도합니다. 따라서 키트 자체가 두 사멸 메커니즘을 감별해 주지는 못하더라도, 실험 조건(부착 방해)을 고려할 때 이 분석에서 나타나는 세포 사멸은 아노이키스로 인한 것이라고 간주할 수 있습니다.

6. 제공된 플레이트가 투명합니다. Calcein AM 염색의 형광 값은 어떻게 측정해야 하나요?

아노이키스 분석 키트에는 세포 부착을 막아 아노이키스를 유도하기 위해 투명한 플레이트가 제공됩니다. Calcein AM 형광을 측정하기 위해서는 세포를 검은색 벽으로 된 플레이트(Black-walled plate)로 옮긴 후, 형광 플레이트 리더기에서 측정하시면 됩니다.

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