유전자 클로닝 | GenBuilder Ultra Cloning Kit | 고마바이오텍

그림 1. 3개 , 5개, 10개의 DNA 조각(각 조각은 약 0.025 pmol, 30 bp의 중첩 서열을 가짐)을 GenBuilder™ Ultra Cloning Kit를 사용하여 조립함으로써 pUC57 벡터를 구축하였습니다. 반응은 50°C에서 40분 동안 수행되었습니다. 조립된 혼합물 2 μl를 Top10 컴피턴트 대장균에 형질전환시킨 후, LB/Amp 플레이트에 도말하였습니다. 최대 10개까지의 DNA 조각을 효율적으로 조립할 수 있음을 보여줍니다.

그림 2. 10개의 DNA 조각(각각 약 0.025 pmol, 30-bp 중첩 서열 포함)을 GenBuilder™ Ultra Cloning Kit를 사용하여 조립함으로써 pUC57, pFastBac™(Thermo Fisher Scientific), 그리고 pET 벡터를 각각 구축하였습니다. 반응은 50°C에서 40분간 수행되었습니다. 각 조립 혼합물 2 μl를 Top10 컴피턴트 대장균에 형질전환시킨 후, LB/Amp 플레이트에 도말하였습니다. 이 데이터는 GenBuilder Ultra가 다양한 종류의 벡터와 호환됨을 보여줍니다. 

그림 3. 약 0.025 pmol의 농도를 가진 4개의 서로 다른 DNA 조각(각 약 3.3 kb 크기)을 30 bp의 중첩 서열(overlap)을 이용해 6.0 kb 벡터에 GenBuilder™ Ultra Cloning Kit로 조립하였습니다. 반응은 50°C에서 40분 동안 수행되었습니다. 조립된 혼합물 5 μl를 Top10 컴피턴트 대장균에 형질전환시킨 후, LB/Amp 플레이트에 도말하여 조립이 완료된 것을 확인하고 PCR로 분석하였습니다. 각 조각의 연결 부위(AB, BC, CD)를 DNA 젤 전기영동으로 확인하였으며, 이는 각 조각이 올바른 순서대로 벡터 내에 성공적으로 조립되었음을 나타냅니다.