iPSC RNA-LNP Reprogramming Cocktail | 고마바이오텍

특징 

5가지 reprogramming factor에 대한 mRNA-지질 나노 입자(LNP) 혼합물로, 인체 피부 섬유아세포 (fibroblast), 말초혈액 단핵세포(PBMCs) 및 다른 체세포들을 효율적으로 유도 만능 줄기세포(iPSCs)로 역분화시키는 데 사용됩니다. 다른 RNA kit에 비해 낮은 독성이 특징입니다.

• RNA를 사용하므로, 세포의 게놈에 외부 유전자가 삽입될 위험이 없습니다.
• Ready-to-use LNP mix 형태로 제공되어 편리합니다.
• Transfection 시약이나 바이러스 조작이 필요 없이, 세포에 바로 추가하여 사용할 수 있습니다.
• 세포 독성이 낮으면서 iPSC로의 재프로그래밍 효율이 높습니다.
• Feeder cell을 사용하는 환경, 또는 feeder-free 환경 모두에 적합하여 실험 디자인의 유연성이 뛰어납니다.

사용 과정 

1. 재프로그래밍 시작 단계 

• 체세포 (예: 섬유아세포(fibroblasts), 말초혈액 단핵세포(PBMCs) 또는 다른 세포 유형)를 feeder 또는 feeder-free 배양 접시에 seeding 합니다.
• RNA-LNP 칵테일을 세포 배양액에 직접 첨가합니다.
• 각 세포 유형에 따라 특정 빈도로 처리합니다. (예시: fibroblast는 그림 1 참고, PBMCs는 그림 2 참고) 

2. 유도 및 유지 단계 

• iPSC 재프로그래밍 칵테일로 처리한 후, 세포들은 유도 단계(induction phase) 전체에 걸쳐 reprogramming medium 내에서 유지됩니다.
• 이 과정이 진행되면서 iPSC colony가 출현할 때까지 배양을 계속합니다.
• 일반적으로 15일째까지 colony가 selection 및 expansion 하기에 충분할 만큼 커집니다. 

iPSC 제작 중 세포 형태 변화 과정

iPSC 재프로그래밍이 진행됨에 따라 관찰되는 세포의 형태 변화를 일자별로 정리하면 다음과 같습니다.

• 4일째 (Day 4): 세포 형태가 크게 변화하기 시작합니다. (재프로그래밍 과정이 시작됨을 나타냄)
• 6일째 (Day 6): 변형 가능한(Deformable) 세포의 수가 증가합니다. (세포가 원래의 체세포 특성을 잃고 유연해지기 시작함)
• 8일째 (Day 8): 응집된 세포(aggregated cells)가 나타납니다. (iPSC로 분화하기 위해 세포들이 뭉치기 시작함)
• 11일째 (Day 11): iPSC와 유사한 세포(iPSC-like cells)가 출현하기 시작합니다. (만능 줄기세포의 특징적인 형태를 갖추기 시작함)
• 13일째 (Day 13): 전형적인 iPSC colony가 형성됩니다. (성공적으로 역분화된 줄기세포 집락이 관찰됨)

iPSC 식별 및 결과

uBriGene의 iPSC Reprogramming mRNA-LNP 칵테일을 사용하여 Human skin fibroblasts를 iPSC로 역분화시켰습니다. 재프로그래밍 18일째에 형성된 콜로니들을 AP 염색(Alkaline phosphatase (AP) Staining)하여 성공적으로 만능 줄기세포 상태로 역분화되었음을 확인하였습니다. 효율은 10%에 이릅니다. 

주요 제품

mRNA-LNP iPSC Reprogramming Kit for Fibroblasts  

RNA-LNP iPSC Reprogramming Kit for PBMC and other challenging cells 

iPSC RNA-LNP Reprogramming Kit 선택가이드