[R&D Systems] TACS MTT Cell Proliferation Assay | 고마바이오텍

특징 

• 세포 생존율 및 증식을 정량적으로 측정할 수 있는 MTT 기반 분석 키트입니다. (Tetrazolium salt 염료 MTT가 세포 내에서 환원되어 보라색의 formazan 결정을 형성하는 것을 이용해, 세포 증식률, 생존율, 세포 독성을 정량적으로 평가할 수 있습니다.)
• 간단한 실험 절차로 손쉽게 세포 증식 분석이 가능합니다.
• 배경 신호가 낮아 정확한 결과 도출이 가능합니다.
• 세포 수와 흡광도 간 선형성이 유지되어 정량성이 우수합니다.
• 로트 간 일관성이 높아 실험 재현성이 뛰어납니다.
• 4°C에서 안정적으로 보관할 수 있어 사용이 편리합니다.
• 다양한 세포 및 오가노이드 모델에 적용 가능해 독성 평가에 유용합니다.

구성품

• MTT Reagent (MTT 시약)
• Detergent Reagent (세포 용해 용액을 포함한 시약)

MTT 분석을 통한 인간 조직 유래 간 오가노이드 평가

인간 간 오가노이드는 생검(biopsy) 조직으로부터 유래되었습니다. 분리한 조직을 Cultrex RGF BME, Type 2 (#3533-005-02)에 넣고 특수 배지에서 배양하여 미분화 간 오가노이드를 형성하였습니다. 이후, Recombinant Human FGF-19 (#969-FG), DAPT (#2634), Dexamethasone (#1126)를 포함한 배지로 분화시켰습니다.

(A) 미처리 대조군과 DMSO 처리된 양성 대조군의 미분화 및 분화된 간 오가노이드의 대표 이미지가 제시되었습니다. (B) 아세트아미노펜, 트로바플록신, 독소루비신을 다양한 농도로 처리한 후 MTT 염색을 정량화한 결과,

각 약물 처리 조건에서 세포 생존율이 농도 의존적으로 감소하였습니다. 이 실험에서는 간 오가노이드가 분화할수록 간독성(hepatotoxicity)에 더 민감하게 반응하는 경향을 보였습니다.

TACS MTT 증식 분석법 및 CometChip 분석법을 이용한 iPSC 유래 간세포의 독성 분석

StemXVivo Hepatocyte Differentiation Kit (#SC033)를 사용하여 iPSC 유래 간세포를 생성하였습니다. 이 세포들을 아세트아미노펜, 트로바플록신, 독소루비신으로 처리하고, (A) TACS MTT Cell Proliferation Assay와 (B) CometChip Assay (#4260-096-ESK)를 이용해 농도 반응 독성 프로파일을 분석하였습니다. 

MTT 분석 결과: Trovafloxacin (100 µM)과 Doxorubicin (10 µM 이상) 처리 시 세포 대사 활성이 유의미하게 감소하였습니다. 

CometChip 분석 결과: 동일한 농도에서 DNA 손상 증가가 관찰되었습니다 (n ≥ 3, 그룹당 반복 수).

HepG2 스페로이드의 독성 분석 – MTT Assay를 이용한 평가

HepG2 스페로이드를 이용한 약물 독성 분석에서, MTT Assay를 통해 trovafloxacin (100 µM)과 doxorubicin (>10 µM)이 세포 대사 활성을 크게 저해하는 독성을 보이는 것이 확인되었습니다.

스페로이드는 Cultrex BME Type 2 (#3533-005-02)에서 21일간 배양한 후 약물에 노출되었습니다.