Western Blot 분석서비스 | 고마바이오텍

특징

• 보내주시는 샘플로 western blot 실험을 진행해 드립니다. 
• 3uL/well 소량의 샘플로 분석이 가능하며, 1ng 이하의 protein도 검출이 가능합니다. 
• 자동화 웨스턴 블롯 시스템 (Jess / Protein Simple)을 이용하여 재현성이 우수합니다. 
• 샘플로딩, 단백질분리, 항체반응, 세척, 검출 전과정이 모두 자동으로 수행되므로 매뉴얼 실험에서 발생할 수 있는 오류를 최소화 합니다.
• 정량 피크 영역을 기반으로 데이터를 제공하여, 육안으로 판단하는 기존 웨스턴 블롯보다 훨씬 정확하고 객관적인 정량 분석 결과를 제공합니다. 
• 화학발광 (Chemiluminescence)과 형광 (Fluorescence) 검출이 모두 가능합니다.
• Kinase 활성, 단백질 동시 분석, 정량적 비교 실험등에 우수한 결과를 제공합니다. 
• 총 단백질(Total Protein) 또는 Housekeeping Protein을 기준으로 자동으로 신호 강도를 정규화(Normalization)하여 시료 로딩량의 차이를 보정합니다.
• 전용 소프트웨어를 이용하여 생성된 전기영동 그래프(Electropherogram)와 정량 피크(Quantitative Peak) 데이터를 제공합니다.
• 연구 보고서나 학술지 투고에 필요한 고화질의 정량 그래프와 이미지를 제공합니다.  

자동화 western blot 시스템 이용

정량 피크 그래프 제공

데이터

Jess를 이용한 total AKT 및 pAKT의 동시 분석과 총 단백질 정규화

(A) Calyculin A로 처리하지 않은 (-) 또는 처리한 (+) Jurkat cell lysate를 각각 0.25 mg/mL 및 0.15 mg/mL의 최종 농도로 분석. 

각 용해물은 total AKT는 IR(녹색 밴드)로, pAKT는 NIR(빨간색 밴드)로 detection 됨 

(B) 패널 A에서 보여준 동일한 라인에서 Total Protein Assay(총 단백질 분석) 수행 

Simple Western 데이터를 통해 RPMI 8266 세포에서 IMiD 및 Degrader에 의한 IKZF1과 IKZF3의 분해 확인.

(A) TL 12-186에 의해 IKZF1이 분해되는 것을 나타낸 Lane 이미지.

(B) Degrader 또는 IMiD 농도에 따른 IKZF1 분해율. 점선은 DC50 값을 계산하기 위해 사용된 50% 분해 기준선을 나타냄.

(C) TL 12-186에 의해 IKZF3이 분해되는 것을 나타낸 Lane 이미지.

(D) Degrader 또는 IMiD 농도에 따른 IKZF3 분해율. 점선은 DC50 값을 계산하기 위해 사용된 50% 분해 기준선을 나타냄.

왼쪽 패널은 Western blot 데이터, 오른쪽 패널은 Simple Western 데이터로, 이는 재조합 BRD4의 Degrader 의존적인 폴리유비퀴틴화를 보여줌. 

반응에 사용된 Degrader의 농도에 따라 기질의 유비퀴틴화 정도가 달라지며, hook effect가 뚜렷하게 나타남.