네, 사용할 수 있습니다. 모든 원시 세포 배양(primary cell culture)에는 증식하는 세포 집단을 분리하는 과정이 포함됩니다. PCT 인자가 포함된 Prime media는 전구세포 분리를 개선하도록 설계되었으므로, 원시 세포 배양을 확립하고 장기간 유지하는 데 이상적으로 적합합니다.
Accutase (Cat# CnT-Accutase-100) : 갑각류에서 분리된 단백질 분해 효소 및 콜라겐 분해 효소의 혼합물입니다. 포유류 성분이 없습니다. Accutase는 대부분의 표면 단백질을 손상 없이 남기는 부드러운 작용과 반응을 중지시키기 위한 별도의 시약이 필요 없다는 점 (분리 직후 배지로 희석하기만 하면 됨) 때문에 권장되는 분리 효소입니다. Accutase는 열에 민감하므로 4°C에 보관해야 합니다. 사용 직전에 필요한 양만 20°C로 데워 사용하십시오. 더 높은 온도에 노출되거나 반복적인 가온/냉각 사이클은 활성 감소를 초래할 수 있습니다.
Trypsin / EDTA : Trypsin, Chymotrypsin 및 Elastase를 포함하는 단백질 분해 효소 용액입니다. Trypsin은 정의되지 않았으며 돼지 유래입니다. 로트(lot)마다 차이가 있을 수 있으며, 세포 분리 직후 별도의 시약 (가급적 동물 성분 없는 억제제, 대안으로 FCS) 으로 비활성화해야 합니다. Trypsin은 Accutase보다 훨씬 공격적이어서 성공적인 분리와 되돌릴 수 없는 세포 손상 사이의 시간 범위가 매우 짧습니다. Trypsin을 사용하는 경우, 노출 시간을 최소화하고 빠른 비활성화를 보장하기 위해 특별히 주의를 기울여야 합니다.
7. 2D 세포 배양과 3D 세포 배양의 차이점은 무엇입니까?
단층 세포 배양(monolayer cell culture)이라고도 알려진 2D 세포 배양은 배양 배지에 잠긴 단일 층으로 세포를 배양하는 것을 포함합니다. 세포는 배양 배지에만 노출되며, '미분화(undifferentiated)' 증식성 표현형으로 유지되거나 추가 분화되도록 유도될 수 있습니다. 대조적으로, 3D 배양은 다층 세포 구조를 형성하도록 세포를 배양하는 것을 포함합니다. 3D 배양은 특정 종류의 덜 분화된 세포 (예: 구형(spheres)으로 자란 진피 전구 세포)를 유지하는 데 사용되거나, 예를 들어 표피와 같이 완전히 분화된 세포 시트를 만드는 데에도 사용될 수 있습니다. 3D 표피 배양은 상단의 최종 분화된 비증식성 세포부터 기저층의 증식성 전구 세포에 이르기까지 전체 범위의 세포 분화를 가능하게 합니다.
8. CELLnTEC 배지는 어떤 온도에서 보관해야 합니까?
Prime media는 보충제(supplement)가 모두 첨가된 상태로 냉동되어 제공됩니다. 사용 준비가 될 때까지 -15ºC ~ -25ºC에서 보관해야 합니다. 사용 직전에 4ºC에서 밤새 해동해야 합니다. 해동 후에는 배지를 4ºC에 보관하고 빛으로부터 보호되도록 해야 합니다. 여러 배지 성분이 빛에 매우 민감합니다.
9. 추가 보충제를 첨가해야 합니까?
아니요, 이 배지는 세포 배양에 필요한 모든 보충제가 첨가된 상태로 제공됩니다. 항생제는 포함되어 있지 않지만 CELLnTEC에서 구매할 수 있으며 원하면 추가할 수 있습니다 (하지만 원시 세포의 일상적인 배양에는 항생제/항진균제 없이 작업하는 것을 권장합니다).
10. CnT-media를 사용할 때 feeder layer 세포, 코팅된 플레이트 또는 조절 배지(conditioned medium)를 사용해야 합니까?
아니요, CnT-media는 feeder layer 세포나 조절 배지 없이 사용하도록 설계되었습니다. 새로운 배양을 분리할 때는 첫 한두 번의 계대 배양에서 플레이트 코팅 (예: 콜라겐 I)이 초기 세포 부착을 개선할 수 있습니다.
11. 보충제가 배지에 첨가된 후 유통 기한은 얼마나 됩니까?
보충제가 첨가된 배지의 유통 기한은 어두운 곳에서 4ºC에 보관했을 때 6주입니다. 모든 빛 노출을 최소화해야 합니다. 대부분의 배양 배지는 어떤 종류의 빛 노출에도 빠르게 분해됩니다.
12. CELLnTEC는 왜 일상적인 배양에 항생제/항진균제 없이 작업하는 것을 권장합니까?
원시 세포는 항생제/항진균제 처리에 민감합니다. 배지에 항생제/항진균제를 보충하면 증식 속도가 느려질 수 있으며 세포의 분화 행동에 영향을 미칠 수 있습니다. 일반적으로 사용되는 모든 항생제는 세포 배양에 사용되는 온도에서 빠르게 분해되어 항생제/항진균제의 비효과적인 농도를 유발할 수 있으며 따라서 내성 미생물 발달의 위험을 높일 수 있습니다. 세포는 2D 및 3D 배양 모두에서 분화 과정 중에 특히 항생제의 효과에 민감합니다. 원시 세포 분리를 위해서는 조직이 무균 상태가 아닌 경우가 많으므로 항생제/항진균제가 종종 필요하며, 따라서 계대 배양 2회까지 항생제/항진균제 사용을 권장합니다.
13. 권장 프로토콜이 있습니까?
네, CELLnTEC는 분리, 계대 배양/냉동, 형질전환(transfection) 및 분화와 같은 광범위한 프로토콜을 제공합니다.
14. 배지 성분에 의해 영향을 받을 수 있는 신호전달 실험을 하고 있는데, 배지의 조성(formulation)을 알 수 있습니까?
배지들의 전체 성분은 공개되지 않지만, 상황에 따라 특정 조성의 함유여부를 안내드릴 수 있습니다.
15. 결과를 발표하기 위해 성분을 알아야 하는데, 배지의 조성(formulation)을 알 수 있습니까?
배지 조성을 알지 못하더라도 과학 저널에 논문을 게재할 수 있습니다. CELLnTEC 웹사이트에는 문헌에 발표된 CELLnTEC 배지 사용의 수많은 예시를 제공하는 광범위한 출판 목록이 있습니다. 또한, CELLnTEC 웹사이트의 리소스 섹션에는 배지의 주요 성분 대부분을 나열한 성분 목록도 있습니다.
16. 저는 초기 계대 배양된 세포를 키우고 있는데, 이 세포들을 CELLnTEC 배지로 바로 바꿔도 됩니까?
현재 사용하고 있는 배지에 따라 다릅니다. 종종 한 배지에 적응된 세포는 다른 배지로 잘 옮겨가지 못하는 경우가 있습니다. 이런 경우, 세포를 이전 배지에서 새 배지로 점진적으로 전환해야 합니다. 이는 전환의 심각성 및 세포의 증식 속도에 따라 1주에서 4주에 걸쳐 이전 배지의 희석 비율을 단계적으로 줄여가며 수행하는 것이 가장 좋습니다. 4주 접근 방식의 경우 다음 희석 비율(새 배지 / 이전 배지)로 수행할 수 있습니다: 20 / 80%, 40 / 60%, 50 / 50%, 60 / 40%, 80 / 20% 그리고 100% 새 배지. 2주 접근 방식의 경우 다음 희석 비율(새 배지 / 이전 배지)을 사용할 수 있습니다: 25 / 75%, 50 / 50 %, 75 / 25% 그리고 100% 새 배지. 배지를 변경하면 때때로 세포 형태나 세포의 성장 행동에 변화를 가져올 수 있다는 점을 염두에 두시기 바랍니다.
17. 세포를 계대 배양한 후에 왜 자라지 않나요?
과도한 소화(overdigestion) 또는 소화 반응을 신속하게 중단하지 못한 것이 가장 흔한 이유입니다. 무혈청 또는 저혈청 배지로 전환할 때 연구자들이 매우 흔하게 겪는 문제는 배지 첨가로 인해 트립신이 비활성화되지 않는다는 것입니다. 트립신으로 과도하게 소화시키면 세포에 돌이킬 수 없는 손상을 줄 수 있으므로, 현미경으로 세포 분리 과정을 면밀히 관찰해야 합니다. CELLnTEC는 세포 계대 배양을 위해 Accutase와 같은 더 부드러운 효소를 사용할 것을 권장합니다.
18. 성체 줄기세포 기반 치료제를 개발하고 있습니다. CELLnTEC 배지는 치료 등급(therapeutic grade) 제품으로 생산됩니까?
Prime media는 모든 동물 및 인간 유래 성분이 전혀 포함되어 있지 않습니다. 이는 세포 치료 응용 분야에 사용하기에 좋은 후보가 됩니다. 필요에 따라 임상 사용 적합성을 높이기 위해 추가적인 QC 테스트를 거쳐 제조될 수 있습니다.
Sampling 관련 FAQ
1. 이전에 분리하여 현재 배지에서 키우던 세포들이 CELLnTEC 배지로 바꾼 후에 잘 자라지 않았습니다. 무엇이 문제일까요?
원시 세포는 특정 세포 배양 배지에 빠르게 적응할 수 있습니다. 따라서 세포 배양을 다른 배지로 바꿀 때는 이전 배지에서 새로운 배지로 점진적으로 전환해야 합니다. 이는 전환의 심각성 및 세포의 증식 속도에 따라 1주에서 4주에 걸쳐 CELLnTEC 배지로 이전 배지를 단계적으로 연속 희석하여 수행합니다.
2. 현재 사용 중인 배지에 비해 분리 효율이 매우 낮습니다. 왜 그럴까요?
배지에 비해 분리 효율이 낮은 이유를 알기 위해서는 몇가지 핵심적인 질문을 할 수 있습니다. 현재 사용 중인 배지는 무엇입니까? FBS 또는 BPE를 포함하고 있습니까? CELLnTEC 배지를 현재 배지와 나란히 비교 테스트했습니까? 분리 프로토콜에 트립신을 사용했습니까? 이 경우 낮은 분리 효율은 과도한 트립신 처리 때문일 수 있습니다. 이전에 트립신 반응은 FBS 또는 BPE의 단백질에 의해 억제되었을 수 있습니다. 과도한 트립신 처리의 다른 이유로는 높은 트립신 농도 또는 너무 긴 트립신 처리 시간이 있습니다.