qPCR Passive Reference Dye | 고마바이오텍

특징

• qPCR의 reporter dye 시그널을 정규화하고 qPCR 반응과 관련없는 well간 광학적 변화를 제거하여 PCR 효율을 보정하기 위해 일부 qPCR 기기는 수동 참조 염료 (passive reference dye)를 필요로 합니다. 일반적으로 ROX dye가 정규화에 사용됩니다. 그러나 ROX dye는 다중 분석에서 주황색 (orange) emission channel에 사용할 수 없습니다. 
  
• VeriFluor™ Far-Red Passive Reference Dye는 JUN™, Cy®3.5, CAL Fluor® Red 610, Texas Red®등의 dye로 라벨링된 probe를 감지하기 위해 red 또는 Mustang Purple™ 채널을 사용합니다. 
• Ex/Em은 640/660 nm로, 대부분의 qPCR 기기에서 Mustang Purple™을 바로 대체할 수 있습니다.
• ROX에 비해 MasterMix에서 더 쉽게 용해되어 well간 균질성이 향상되고 qPCR normalization이 더 정확해 집니다. 여러 타입의 MasterMix와 잘 호환되며, 특히 Forget-Me-Not™ MasterMix와 사용시 매우 효과적입니다. 
  
• ​DNA 추출을 위해 사용되는 DTT는 Mustang Purple™ qPCR passive reference dye를 quenching하여 정규화 결과가 부정확하고, 샘플내 DNA 농도가 과다하게 측정될 수 있습니다. 반면 VeriFluor는 DTT에 영향을 받지 않아 추가적인 실험 변경없이 그대로 이용할 수 있어 편리합니다. 

Figure 1. Non-normalized qPCR plot with Forget-Me-Not™ Master Mix with EvaGreen® (Greens) and VeriFluor™ Far-Red Passive Reference (Purples) on the QuantStudio 5 qPCR instrument. There is no distinguishable difference between VeriFluor™ Far-Red or EvaGreen® signal with or without 4mM DTT.