1. Kit 사용시 파티클의 응집이 생기는 이유와 해결 방법은 무엇인가요?
샘플이 충분히 섞이지 않았거나, 파티클 입자가 적절하게 확산되어 섞이지 않았거나, 충분히 활성화가 되지 않았거나, conjugation 효율이 낮을때 응집이 발생할 수 있습니다.
응집이 관찰되면, vortexing을 하여 섞어주고 5분 동안 또는 적절히 흩어질 때까지 초음파를 이용하여 입자를 분해합니다.
응집이 계속 관찰되면 위 과정을 반복합니다. 보관, 세척, vortexing과 초음파 처리를 반복하면 모든 응집은 분해됩니다. 단백질 conjugation 단계에서 생성되는 비가역적인 응집은 BSA와 같은 2차 비기능성 단백질을 사용하여 최소화할 수 있습니다.
2. 백그라운드 신호가 생기는 이유와 해결 방법은 무엇인가요?
Blocking이 적절하지 않을때 백그라운드, 즉 NSB가 생길 수 있습니다. Blocking solution을 최적화하세요. AnteoTech은 10% w/v BSA를 Blocking diluent(#A-CMPBDF1)에 희석하는 것을 추천합니다. 혹은 casein, fish skin gelatine, 합성 blocker 등, 다양한 blocker를 사용할 수 있습니다
3. AnteoBind는 어떤 방법으로 antibody와 particle의 linkage를 형성하나요?
AnteoBind는 Cr3+ 이온을 이용하여 파티클/비드 표면을 코팅하여 양이온화 시켜 여기에 음이온성 물질 (예, 단백질)이 conjugation 되도록 하는 원리입니다. AnteoBind는 파티클/비드의 표면에 강력하게 결합하는 동시에, 활성화된 표면에 항체와 같은 biomolecule이 부드러우면서도 강력하게 결합하도록 벨크로 같은 역할을 합니다.
5. 항체의 사용 농도는 얼마나 되나요?
Nano Kit는 50-400 µg antibody/mg 을 권장하고, Micro Kit는 5-30 µg antibody/mg particle 을 권장합니다. 너무 많거나 너무 적은 항체는 conjugated particle의 작용을 감소시킬 수 있으므로 최적의 농도는 미리 결정하는 것이 좋습니다.
6. 어떤 particle과 호환되나요?
7. Monoclonal 항체와 Polyclonal항체를 이 키트에 사용할 수 있나요?
네. Monoclonal 항체와 Polyclonal항체 모두 사용할 수 있습니다.
8. Particle을 나중에 사용하려면 어떻게 보관해야 하나요?
Particle을 얼리면 비가역적으로 clumping이나 clustering이 생성될 수 있으므로 냉장보관합니다.
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