1. Blocking Peptide는 무엇인가요?
Blocking Peptide는 다클론 항체를 생성하는 동안 면역화에 사용하는 원래의 항원입니다. 항체가 타겟팅하는 단백질에 결합하는지 확인하기 위해 면역분석을 할 때 음성대조군으로 사용할 수 있습니다. Blocking peptide는 1차 항체와 경쟁하하거나 blocking하기 때문에 "immunizing peptide"나 "negative control antigen"으로 불리기도 합니다.
2. Blocking Peptide는 언제 어떻게 쓰이나요?
Blocking peptide는 항체 결합을 경쟁하거나 차단하는 용도로 사용할 수 있으므로, 웨스턴 블롯(WB)이나 IHC, ICC와 같은 면역 실험에서 항체 특이성을 위해 대조군으로 사용할 수 있습니다. 예를 들면, 웨스턴 블롯에서 blocking peptide를 사용할 때, blocking peptide와 함께 미리 배양한 항체가 항체 결합 부위를 차지하게 되어 관심 단백질의 epitope 부위에 비특이적 결합이 발생하는 것을 방지할 수 있습니다. Blocking peptide 없이 항체만 사용한 경우와 비교하여 비특이적 결합을 확인할 수 있습니다.
3. Blocking peptide는 표적 단백질과 어떻게 유사한가요?
Blocking peptide는 표적 단백질의 epitope (항체가 인식하는 특정 아미노산 서열)에 해당합니다.
4. Blocking peptide를 사용하여 WB를 진행했는데, 예상한 MW 외에도 여러 밴드가 사라진 이유가 있을까요?
두 가지 가능성이 있습니다. 우선, MW가 예상보다 높은 경우, 관심 단백질이 번역 후 수정을 거칠 가능성이 있는지 고려해보세요. MW가 예상보다 낮은 경우, 관심 있는 단백질이 절단된 형태이거나 샘플에서 분해되었을 가능성을 고려해 보세요.
5. Blocking peptide를 이용하여 IHC를 진행할 때, Serum을 선택할 때 고려할 사항이 있나요?
2차 항체를 키운 종과 동일한 종의 serum을 사용하는 것을 권장합니다.
6. IHC를 할 때, Blocking peptide의 농도는 어느 정도로 권장하나요?
Blocking peptide의 농도는 working dilution의 항체 농도의 최소 10배를 사용하는 것을 권장합니다.
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