Vectors for iPSC Generation

• Lentiviral Vectors for iPS Cell Generation (OCT3/4, SOX2, NANOG, LIN28, c-Myc, KLF4)
  • 6가지 Stem cell factor (OCT3/4, SOX2, NANOG, LIN28, c-Myc, KLF4)를 유도합니다.
  • Lentiviral particle을 이용하여 분열 및 미분열 세포 내로 gene을 transfer하는것이 용이합니다.
  • 안정적인 Lentiviral particles를 이용하여 long term expression이 가능합니다.
  • Human 과 mouse용 두가지를 가지고 있습니다.
  • 공통적으로 RFP-Blasticidine / Neomycine 마커를 포함하며, CMV promotor를 가지고 있습니다.
    
  • Human의 경우, 그외에도 마커없이 EF1a promoter를 가지고 있는 타입으로 선택이 가능합니다.
    
  • Inducible single vector particles를 이용하여 간단한 iPS cell generation이 가능합니다.
    
• Lentiviral Vectors for iPS Cell Generation (OCT3/4, SOX2, c-Myc, KLF4)
  • Klf4, Oct3/4, Sox2, c-Myc gene이 fusion된 Single polycistronic vector 입니다.
  • Lentivirus vector를 이용하여 분열및 미분열세포내로 gene을 transfer하는것이 용이합니다.
  • brain, liver, muscle, retina in vivo등에 독성이나 면역반응유발없이 잘 transfection 됩니다.
  • multi-virus transduction에 비해 10배 이상, non-viral methods에 비해 500배 이상 효율이 좋습니다.
  • GFP reporter를 포함하고 있습니다.

Schematic representation of pLentG-KOSM lentiviral vector (13 kb). Digestion with NotI and RsrII produces 3 kb and 10 kb DNA fragments.

• Retroviral Vectors for iPS Cell Generation
  • Moloney murine leukemia virus (MMLV) 유래 pMXs retroviral vector를 이용하였습니다.
  • ampicillin-resistance gene, MMLV LTRs, package signal and human c-Myc gene cloned (NotI site)로 구성됩니다.
  • somatic cell로부터 iPS cells을 생성하기 위한 4-6가지 transcription factors를 발현합니다. (Oct3/4, Sox2, c-Myc, Klf4, NANOG and Lin-28),
  • Human, Mouse 용 vector가 제공됩니다.

Schematic representation of pMXs-hKlf4 retroviral vector (5.9 kb)

Schematic representation of pRetro-p53 shRNA (Human) retroviral vector

• Retroviral Packaging Cells for iPS Cell Generation
  • 293T cell line 유래 potent retrovirus packaging cell line입니다.
  • Higher retroviral yields: average titer 10^7 infectious units/mL with transient transfection
  • Longer stability: up to 4 months in the presence of drug selection
  • Three versions: ecotropic (Plat-E), amphotropic (Plat-A), and pantropic (Plat-GP)
  • Citation : Li, W. et al. (2009). Rb/Cdk2/Cdk4 triple mutant mice elicit an alternative mechanism for regulation of the G1/S transition. PNAS 106:486-491. (#RV-101)

• Glutamatergic Neurons & Skeletal Myocytes
• Platinum Retroviral Expression