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[FAQ] MRA (Mycoplasma Removal Agent)

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  1. Mycoplasma 란 무엇입니까?
  세포 배양 시 가장 흔하게 오염되는 미생물의 일종으로, 일반적인 세포배양에서 80~25%의 세포가 Mycoplasma에 오염되어 있으며, 한 번 오염되면 실험실 전체가 오염되게 됩니다. 그러나 눈으로 관찰 되지 않아 오염 사실을 확인하기 어려우며, 일반 항생제로 제거가 어렵습니다. 오염될 경우 세포증식, 대사 및 분화 등에 심각한 영향을 미칩니다. 
  2. Mycoplasma가 세포에 어떠한 영향을 끼치나요? 
  Mycoplasma 오염은 배양 중인 세포에 크고 다양한 damage를 입히게 됩니다. 영양성분을 고갈시키고, 독성물질을 분비하여 세포의 형태를 변하시키거나 성장을 저해합니다. 또한 Histone의 중요성분인 arginine을 고갈시켜 염색체 이상과 변형을 유발합니다. Mycoplasma에 의해 생성된 exonuclease과 endonuclease이 배양액에 방출되게 되면 세포의 DNA, RNA degradation이 일어나게 됩니다. 또한 Mycoplasma 오염은 면역반응을 자극시키고, virus production을 감소시킵니다. 
  3. Mycoplasma 오염여부를 어떻게 확인하나요?
  Mycoplasma는 육안으로 관찰이 되지 않아, 특수 실험을 진행하지 않는 한 오염 여부를 확인할 수 없습니다. 주로 분자생물학적 방법과 형광 염색 방법을 이용하여 Mycoplasma를 검출합니다. 그러나 PCR, ELISA, Dot-blot 등의 분자생물학적 방법은 시간이 오래 걸리는 단점이 있습니다. MP Biomedicals의 Mycoplasma Hoechst Stain Kit (Cat# 093030000)를 이용한 염색방법을 통해 단 2시간 안에 오염여부 판단이 가능합니다. 
  4. MRA (Mycoplasma Removal Agent)의 작용기작은 무엇입니까?
  Mycoplasma는 세포벽이 없기 때문에 대부분의 항생제에 대해 내성을 가지고 있으며, MRA는 DNA gyrase에만 특이적으로 작용하여 세포 독성이 없으므로 배양중인 세포에는 영향을 주지 않고 안전하게 사용할 수 있습니다.
  5. Mycoplasma Removal Agent의 사용방법은?
  MRA를 1/100의 농도로 배양액에 처리 후, 일주일 간 incubation 하여 Mycoplasma를 제거합니다. 배지 10ml에 사용할 경우, MRA solution 0.1ml (100 ul)을 추가하시면 됩니다. 희석농도 1/100은 초기 제안 농도로 세포에 따라 조정이 가능합니다. 중간에 Media를 교체하거나 passage 진행 시에도 동일 농도의 MRA를 첨가하시면 됩니다. 대부분의 mycoplasma에 적용이 가능하여 별도의 추가 시약이 필요하지 않습니다. Serum이나 trypsin에 mycoplasma 오염 가능성이 있는 경우, culture media 제조 시 MRA를 0.1 ug/ml 농도로 첨가하여 Mycoplasma 오염을 사전에 예방할 수 있습니다.
  6. 실험에 필요한 벡터의 양은 어느 정도 입니까? 
  In vitro 실험에 필요한 벡터의 양은 각각의 세포에 맞는 infection titer에 의하여 결정됩니다. "293 Cell의 경우, 5000GC/cell은 90 %이상의 titer를 보입니다. 따라서 AAV의 1e11 GC는 이천만 개의 세포를 감염 할 수 있습니다. " In vivo실험에 필요한 벡터의 양은 진행될 실험에 따라 달라집니다. 일반적으로 정맥주사를 통하여 쥐에 AAV를 투여할 경우, 체중 1 kg 당 1e12 GC의 AAV가 사용됩니다. 25g의 쥐를 사용할 경우 1e12 GC AAV로 40마리의 쥐에 주사가 가능합니다. 
  7. 세포 독성이 정말 없나요? 
  세포에 미치는 어떤 영향도 관찰된 바가 없으며, 영국의 ECACC와 같은 세포 은행에서도 사용하는 제품입니다. 
  8. Media에 희석해 놓고 사용해도 되나요? 
  희석하여 오래 보관할 경우 activity가 떨어질 수 있으므로, fresh하게 만들어 사용할 것을 더 권장드립니다. 
   
   
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