[고마식품안전뉴스 2019년 Vol.22] 식품공전상 새롭게 도입될 미생물 시험법
	금주는 식품공전 미생물 시험법에 새롭게 개정될 사항에 관한 것입니다. 국제적으로 공인된 분자생물학적시험법 도입에 대해 안내해 드립니다.
	식품의 기준 및 규격 일부개정고시(안) 행정예고 1. 개정 이유 미생물 시험법을 현장에서 적용이 용이하도록 개선 국제적으로 공인된 분자생물학적 시험법을 도입하여 장염비브리오, 리스테리아 모노사이토제네스의 신속한 검출이 가능하도록 함 2. 주요 내용   바. 일반시험법 개정 등     9) 장염비브리오 및 리스테리아 모노사이토제네스에 국제적으로 공인된 분자생물학적시험법 도입
	식품의 기준 및 규격 일부개정고시(안)
	제8. 4. 4.26 중 다.를 다음과 같이 신설한다.					제8. 4. 4.26 중 라.를 다음과 같이 신설한다.
	다. 장염비브리오 시험법					다. 장염비브리오 시험법
	1) 주형 유전자 준비   증균 배양액(1∼2 mL)을 취한 후, 유전자 추출키   트 및 장비 등을 사용하여 유전자를 추출한다.					1) 주형 유전자 준비   증균 배양액(1∼2 mL)을 취한 후, 유전자 추출키   트 및 장비 등을 사용하여 유전자를 추출한다.
	2) Real-time PCR 프라이머 염기서열					2) Real-time PCR 프라이머 염기서열
	Target gene	염기서열(5‘→3’)				Target gene	염기서열(5‘→3’)
	toxR	Foward	GAA CCA GAA GCG CCA GTA GT			iap	Foward	CTA AAG CGG GAA TCT CCC TT
		Reverse	AAA CAG CAG TAC GCA AAT CG				Reverse	CCA TTG TCT TGC GCG TTA AT
		Probe	FAM-TCA CAG CAG AAG CCA CAG GTG C-TAMRA				Probe	FAM-CCT CTG GCG CAC AAT ACG CTA GCA CT- TAMRA
	3) Real-time PCR 반응액 조제					3) Real-time PCR 반응액 조제
	성분	최종농도	Stock용액 농도	1회 용량		성분	최종농도	Stock용액 농도	1회 용량
	Master Mix	1x	2x	12.5 μL		Master Mix	1×	2×	12.5 μL
	toxR 프라이머 (F)	100 nM	10 pmol/μL	0.25 μL		iap 프라이머(F)	300nM	10 pmole/μL	2.5 μL
	toxR 프라이머 (R)	100 nM	10 pmol/μL	0.25 μL		iap 프라이머(R)	300nM	10 pmole/μL	2.5 μL
	toxR 프로브 (P)	500 nM	10 pmol/μL	1.25 μL		iap 프로브(P)	300nM	10 pmole/μL	2.5 μL
	주형 DNA	-	-	5 μL		주형 DNA	-	-	5 μL
	증류수	-	-	5.75 μL		총량	-	-	25 μL
	총량	-	-	25 μL
						4) Real-time PCR 반응조건
	4) Real-time PCR 반응조건					구분	온도	시간	반응회수
	구분	온도	시간	반응회수		초기변성(Initial denaturation)	50℃	2분