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[고마식품안전뉴스 2019년 Vol.22] 식품공전상 새로 도입될 미생물 시험법

금주는 식품공전 미생물 시험법에 새롭게 개정될 사항에 관한 것입니다.

국제적으로 공인된 분자생물학적시험법 도입에 대해 안내해 드립니다.

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  [고마식품안전뉴스 2019년 Vol.22] 식품공전상 새롭게 도입될 미생물 시험법  
  금주는 식품공전 미생물 시험법에 새롭게 개정될 사항에 관한 것입니다.
국제적으로 공인된 분자생물학적시험법 도입에 대해 안내해 드립니다.
 
   
   
                     
  식품의 기준 및 규격 일부개정고시(안) 행정예고

1. 개정 이유
미생물 시험법을 현장에서 적용이 용이하도록 개선
국제적으로 공인된 분자생물학적 시험법을 도입하여 장염비브리오, 리스테리아 모노사이토제네스의 신속한 검출이 가능하도록 함

2. 주요 내용
  바. 일반시험법 개정 등
    9) 장염비브리오 및 리스테리아 모노사이토제네스에 국제적으로 공인된 분자생물학적시험법 도입 
 
   
   
   
   
   
   
   
   
                     
  식품의 기준 및 규격 일부개정고시(안)  
  제8. 4. 4.26 중 다.를 다음과 같이 신설한다.   제8. 4. 4.26 중 라.를 다음과 같이 신설한다.  
  다. 장염비브리오 시험법   다. 장염비브리오 시험법  
   1) 주형 유전자 준비
  증균 배양액(1∼2 mL)을 취한 후, 유전자 추출키
  트 및 장비 등을 사용하여 유전자를 추출한다.
   1) 주형 유전자 준비
  증균 배양액(1∼2 mL)을 취한 후, 유전자 추출키
  트 및 장비 등을 사용하여 유전자를 추출한다.
 
     
     
   2) Real-time PCR 프라이머 염기서열    2) Real-time PCR 프라이머 염기서열  
  Target gene 염기서열(5‘→3’)   Target gene 염기서열(5‘→3’)  
  toxR Foward GAA CCA GAA GCG CCA GTA GT   iap Foward CTA AAG CGG GAA TCT CCC TT  
  Reverse AAA CAG CAG TAC GCA AAT CG   Reverse CCA TTG TCT TGC GCG TTA AT  
  Probe FAM-TCA CAG CAG AAG CCA CAG GTG C-TAMRA   Probe FAM-CCT CTG GCG CAC AAT ACG CTA GCA CT- TAMRA  
                     
   3) Real-time PCR 반응액 조제    3) Real-time PCR 반응액 조제  
  성분 최종농도 Stock용액 농도 1회 용량   성분 최종농도 Stock용액 농도 1회 용량  
   Master Mix 1x 2x 12.5 μL   Master Mix 12.5 μL  
  toxR 프라이머 (F) 100 nM 10 pmol/μL 0.25 μL   iap 프라이머(F) 300nM 10 pmole/μL 2.5 μL  
  toxR 프라이머 (R) 100 nM 10 pmol/μL 0.25 μL   iap 프라이머(R) 300nM 10 pmole/μL 2.5 μL  
  toxR 프로브 (P) 500 nM 10 pmol/μL 1.25 μL   iap 프로브(P) 300nM 10 pmole/μL 2.5 μL  
  주형 DNA - - 5 μL   주형 DNA - - 5 μL  
  증류수 - - 5.75 μL   총량 - - 25 μL  
  총량 - - 25 μL      
             4) Real-time PCR 반응조건  
   4) Real-time PCR 반응조건   구분 온도 시간 반응회수  
  구분 온도 시간 반응회수   초기변성(Initial denaturation) 50℃ 2분 -  
  초기변성(Initial denaturation) 95℃ 10분 -   95℃ 10뷴 -  
  변성(denaturation) 95℃ 15초 45   변성(denaturation) 95℃ 15초 40  
  결합(annealing) 60℃ 1분   결합(annealing) 60℃ 1분  
                     
   5) 결과 확인
  (1) PCR 반응에서 증폭곡선이 확인되지 않는 경
    우 장염비브리오 불검출  로 판정할 수 있다.
    다만, 음성대조군에서 증폭곡선이 확인되거나
    양성대조군에서 증폭곡선이 확인되지 않을 경
    우 재시험하여야 한다.
  (2) 증폭곡선이 확인되는 경우 분리배양 후 생화
    학적 검사 등을 통하여 장염비브리오로 동정
    되면 검출로 판정한다.
   5) 결과 확인
  (1) PCR 반응에서 증폭곡선이 확인되지 않는 경
    우 장염비브리오 불검출  로 판정할 수 있다.
    다만, 음성대조군에서 증폭곡선이 확인되거나
    양성대조군에서 증폭곡선이 확인되지 않을 경
    우 재시험하여야 한다.
  (2) 증폭곡선이 확인되는 경우 분리배양 후 생화
    학적 검사 등을 통하여 장염비브리오로 동정
    되면 검출로 판정한다.
 
     
     
     
     
     
     
     
     
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