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제  목   Comet assay (Alkaline method)
이  름 박상훈 등 록 일 2018-08-22 조 회 수 41
안녕하세요.

웹서치하다가 Comet assay kit를 판매하길래 문의드립니다.

최근에 식물의 잎에서 nuclei를 분리하여 comet assay를 진행 중에 있는데(실험방법은 논문참고, Kit 아님), 결과가 잘 안나와서 몇가지 질문 및 고마바이오텍에서 판매 중인 Kit에 대해 질문드립니다.

먼저, 핵은 extraction이 잘 되어서 현미경으로 detection하였습니다. 하지만, 전기영동 이후 DNA fragment들이 comet 형태로 나가지 않습니다.

현재 제가 생각하는 문제점은 전기영동, 논문에서 26V, 300mA, 5~30min 동안 전기영동을 하라고 하였는데, 저희 실험실에서 현재 가지고 있는 장비(Hoefer gele electrophoresis tool)로 실험을 진행하면, Volatage는 고정이 되지만, 전류는 반토막이 나서 160mA 정도로 진행이 됩니다.
-> 전기영동기기가 잘못 된건지 알 수 있을까요? 그리고 이 실험에 적합한 전기영동 장비를 고마바이오텍에서 판매하고 있나요?

다음으로, 전기영동 후 nuclei를 염색하는데 본인의 경우에는 EtBr을 사용합니다. 실험실 내에 Gel Red도 있는데 사용가능한지(논문들에서는 사용을 X), 또한 고마바이오텍에서는 어떤 staining 시약을 사용하는지 여쭙고 싶습니다.

감사합니다.

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