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자주묻는 질문

G-LISA VS. Pull-Down Assay

G-LISA VS. Pull-Down Assay
G-LISA Traditional Pull-down
Assay 당 시료양 10-50 μg 500-2000μg
Asssay time ≤3 h 10-12h
Lysate clarification 불필요 필요
sample handling ≥96 samples ≤10 samples
Quantitative data Yes semi
G-LISA 와 Pull down 기법 선택의 기준은 무엇입니까?
요구되는 실험 장비, 시료의 양 등이 선택의 기준이 됩니다.
자세한 사항은 다음 표를 참고하세요.
Pull-down assay 방식은 장점은 무엇인가요?
적은 수의 샘플로 진행하는 경우, 빠르게 확인이 가능합니다. 또한 colored bead로 인하여 pellet의 확인이 용이합니다.
Pull-down assay에서 doublet band 생성의 원인은 무엇인가요?
Sample buffer내 bead가 골고루 섞이지 않았거나 혹은 SDS-PAGE 전에 protein denaturation이 제대로 되지 않은 경우 발생할 수 있습니다.
Doublet band가 나타났을 경우, 2x sample buffer를 사용하여 resuspending하거나 1분간 열처리를 해주시면 해결됩니다.
Absorbance-based G-LISA assays에서 샘플 사이의 variability는 왜 생기는 건가요?
Washing 과정 사이에 과도한 Tapping을 하지 않는 것이 좋습니다.
Bubble이 흡광도에 영향을 줄 수 있기때문에 well안의 bubble 여부를 확인하는 것이 중요합니다.
특정 Cell, tissue lysate 에서 G-LISA를 사용할 수 있나요?
기본적으로 G-LISA kit 는 모든 mammalian cell, Eukaryotic organism 에 사용이 가능합니다.
자세한 사항은 다음의 Table 에서 확인 가능합니다.
Species Cell/Tissue Type Citation
Bovine Bovine brain microvascular endothelial cells Higashibata et al., 2006. BMC Biochem. 7, 19
Canine MDCK cells Chastre et al., 2009. FASEB J. 23, 916
Chick Embryonic neural plate tssue Kinoshita et al., 2008. Mol Biol Cell. 19, 2289
Hamster Chinese hamster ovary cells Abu-Elneel et al., 2008. J Biol Chem. 283, 32781
Human PC-3 human prostate cancer cells Sequeira et al., 2008. Clin Exp Metastasis. 25, 569
Human Bone marrow mesenchymal stromal cells Musso et al., 2010. Haematologica. DOI: 10.3324/haematol.2010.031633
Human Rectus abdominus muscle tssue Jin et al., 2011. J Clin Invest. 121, 918
Human Human microvascular endothelial cells Schlegel and Waschke, 2010. Microcirculaton. 16, 521
Human Human umbilical vein endothelial cells Stankiewicz et al., 2010. Biochem Biophys Res Commun. 391, 443
Human Brain Metastatc Melanoma Cells Ridgway et al., 2010. J Cell Biochem. 111, 1299
Human HEp-2 cells Lesato et al., 2008. Respiraton. 76, 434
Human Human Alveolar Epithelial Type II Cells Fang et al., 2010. J Biol Chem. 285, 26211
Human U87 glioblastoma/astrocytoma cells Pontow et al., 2007. Virology. 368, 1
Human Primary dermal microvascular endothelial cells Baumer et al., 2009. J Cell Physiol. 220, 716
Human Caco-2 E cells, a subclone of Caco-2 BBE Rapier et al., 2010. Cancer Cell Int. 10, 24
Human HeLa cells Mercer and Helenius, 2008. Science. 320, 531
Human HEK293 cells Chastre et al., 2009. FASEB J. 23, 916
Human MDA-MB-231 cells Zuo et al., 2006. Biochem Biophys Res Commun. 351, 361
Human Hs578T cells Zuo et al., 2006. Biochem Biophys Res Commun. 351, 361
Human Primary brain microvascular endothelial cells Ramirez et al., 2008. J Immunol. 180, 1854
Mouse Primary keratinocytes Nini and Dagnino, 2010. Anal Biochem. 398, 135
Mouse Frozen tumors from p190B and rtTA/Neu mice McHenry et al., 2010. Breast Cancer Res. 12, R73
Mouse Astrocytes in primary culture Lichtenstein et al., 2010. J Alz Dis. 22, 1135
Mouse Mouse bone marrow-derived monocytes Murthy et al., 2009. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 297, L846
Mouse Primary myocardial endothelial cells Schlegel et al., 2008. Am J Physiol Cell Physiol. 294, C178
Mouse Osteoclast cells Vives et al., 2011. J Bone Miner Res. 26, 1099
Mouse ATDC5 cells Woods and Beier, 2006. J Biol Chem. 281, 13134
Mouse Fibroblast cells Bradley et al., 2006. Mol Biol Cell. 17, 4827
Rabbit Renal and femoral artery rings Alvarez et al., 2010. Br J Pharmacol. 160, 1326
Rat Hippocampal tssue lysate Johanna et al., 2010. Neurochem Int. 57, 762
Rat Aortc rings Yang et al., 2010. Environ Toxicol Pharmacol. 29, 290
Rat GP8/3.9 cells Schreibelt et al., 2007. FASEB J. 21, 3666
Rat Spinal commissural neurons Moore et al., 2008. Development. 135, 2855
Rat Primary pancreatc beta-cells from islet cells Hammar et al., 2009. Endocrinology. 150, 2072
Rat B35 neuroblastoma cells Seifert et al., 2008. Neurosci Let. 450, 176
Rat Hippocampal primary neurons Romero et al., 2010. Toxicol Sci. 118, 602
Rat Cerebellar primary neurons Tanaka et al. , 2007. J Biol Chem. 282, 10506
Rat Primary cardiomyocytes Ganguly et al., 2011. Endocrinology. 152, 247
Matrigel 혹은 3D growth condition에서 성장한 세포를 G-LISA에 사용할 수 있나요?
Matrigel, Collagen gel 에서 배양된 세포는 Luminescence-based-kit와 이용이 가능합니다. 3D culture에서 배양된 소량의 세포는 Pull-down 기법 보다 G-LISA 를 통한 assay 방식이 적당합니다.