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AAV (Adeno-Associated Virus) 제작 서비스
AAV (Adeno-Associated Virus)의 장점은 무엇입니까?
AAV (Adeno-Associated Virus)는 세포분열에 상관없이 다양한 세포(근육, 뇌, 심장, 혈관 등)를 효율적으로 감염시키는 Vector입니다. 사용 가능한 세포의 종류가 많을 뿐 아니라 기존의 레트로바이러스와 달리 질병을 일으키지 않아, 세포내의 면역반응을 유발하지 않습니다.
제공되는 8가지 Serotype는 무엇입니까?
제작 가능한 Serotype은 8가지입니다. (AAV 1,2,3,4,5,6,8,9) Serotype의 선택은 진행되는 연구와 세포에 따라 다릅니다. 일반적으로 AAV1은 뇌 연구 분야에 AAV6와 AAV8은 주로 근육관련 연구에 사용되고 있습니다.
제작서비스를 위해 무엇을 제공하면 됩니까?
Shuttle plasmid를 제작하여 제공하시면 됩니다. AAV의 packaging capacity는 4.7 kb이며, Gene size는 2.2-3.5kb까지로 제한됩니다. Shuttle plasmid의 제공이 어려우실 경우, shuttle plasmid의 제작서비스를 이용하실 수 있습니다. 원하는 유전자의 PCR fragment나 plasmid를 제공하시면 shuttle plasmid 제작을 통한, AAV 제작서비스를 함께 진행하실 수 있습니다. 유전자를 가지고 있지 않으신 경우에도, 라이브러리를 통한 제작이 가능합니다.
siRNA 발현에도 적합합니까?
AAV shuttle plasmid는 siRNA 발현에도 적합하도록 고안되었습니다.
정맥주사를 통해 들어간 AAV는 어디로 이동하게 되나요?
Serotype, 투여량, 투여경로, 시간에 따라 차이가 있습니다. 꼬리정맥을 통해 주입 된 AAV2는 주로 폐, 간에서 탐지가 가능합니다. 폐와 간 이외의 다른 장기에서도 검출이 되지만 상대적으로 미미한 양입니다.
실험에 필요한 벡터의 양은 어느 정도 입니까?
In vitro 실험에 필요한 벡터의 양은 각각의 세포에 맞는 infection titer에 의하여 결정됩니다. "293 Cell의 경우, 5000GC/cell은 90 %이상의 titer를 보입니다. 따라서 AAV의 1e11 GC는 이천만 개의 세포를 감염 할 수 있습니다. " In vivo실험에 필요한 벡터의 양은 진행될 실험에 따라 달라집니다. 일반적으로 정맥주사를 통하여 쥐에 AAV를 투여할 경우, 체중 1 kg 당 1e12 GC의 AAV가 사용됩니다. 25g의 쥐를 사용할 경우 1e12 GC AAV로 40마리의 쥐에 주사가 가능합니다.
Serum이 포함 된 배지를 사용해도 되나요?
In vitro 실험에서 FBS(Fetal bovine serum)와 Calf serum은 AAV infection에 영향을 미치지 않습니다. 사람의 44%가 AAV의 항체를 가지고 있습니다. 그러므로 Human serum을 사용해야 하는 경우, neutralizing antibody의 titer test를 진행하는 것이 좋습니다.
발현까지 어느 정도 소요되나요?
Cell culture의 경우, 24시간 이후 post-infection검출이 가능하나, 권장시간은 48시간입니다. In vivo실험의 경우, Short-term expression은 1주일의, long-term expression은 1년 이상 지속이 가능합니다.
제작된 AAV의 보관 방법 및 주의사항은 무엇입니까?
AAV는 4°C에서 일주일간 안정적입니다. -80°C에 보관하는 것이 가장 좋습니다. 또 한, 반복적인 freeze/thaw를 가급적 피하여주시고 희석하여 보관하는 것을 피해주셔야 합니다. Vector가 플라스틱에 붙을 수 있으므로, 파이페팅을 최소화해야 합니다.