Apoptosis를 어떤 방법으로 측정하는 건가요?
TUNEL assay 방법을 이용하여 DNA frgment 말단에 digoxigenin-dNTP를 붙힌 후, Anti-digoxigenin-HRP과 반응시켜 DAB으로 발색한 뒤, 현미경으로 apoptosis를 관찰합니다.
Cell에서 바로 사용할 수 있나요?
네. Cell cultures 샘플 외에도 formalin-fixed tissues, paraffin embedded tissues, cryostat sections, cell suspensions, cytospins 등 cell만 있으면 바로 apoptosis 확인이 쉽게 가능합니다.
줄기세포의 apoptosis 확인도 가능한가요?
네, 가능합니다. 보다 자세한 내용은 다음의 파일(
an1237en00.pdf)을 참고해주세요.
Xylene은 언제 사용하나요?
표본 설치 전 de-waxing paraffin tissues와 분석 마지막 단계인 dehydration 과정에서 Xylene이 사용됩니다. Xylene은 유기용매로 사용하지 않을 때는 뚜껑을 꼭 닫으셔야 합니다.
Control Slides도 함께 제공되나요?
본 Kit 구성품 중 Control Slides는 포함되지 않습니다. ApopTag® Positive Control Slides (Cat. No. S7115)를 별도로 구매해주세요.
ApopTag® Plus Peroxidase In Situ Apoptosis Detection Kit (S7101)과 ApopTag® Plus Fluorescein In Situ Apoptosis Detection Kit(S7111)는 Positive control slides가 함께 제공됩니다.
분석 진행 도중 실험을 잠시 멈추고 싶습니다. 어느 과정에서 중단하여 샘플을 임시로 보관할 수 있을까요?
- 슬라이드를 Equilibration Buffer 또는 water로 적신 후, 4°C-상온에서 약 60분간 보관할 수 있습니다.
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TdT enzyme과 반응시킨 이후 : 슬라이드를 Stop-Wash Solution으로 5분간 wash하고, 70% EtOH가 들어있는 coplin jar에 넣어 -20°C에서 최소 3일 보관이 가능합니다.
보관 후 분석을 계속 진행하기 전, PBS로 2분간격으로 샘플을 3번 washing하여 이물질을 제거해주세요.
분석시간은 얼마정도 걸리나요? 분석시간을 좀 더 줄이고 싶으면 어떻게 해야할까요?
샘플에 따라 분석시간은 조금 차이가 있습니다. Paraffin sections의 경우 4시간, Tissue cryosections 또는 cultured cells의 경우 약 3시간 반 정도의 시간이 걸립니다.
분석시간을 줄이기 위해선 Pretreatment와 quenching 후, 샘플을 deionized water(dH2O)로 washing 해주세요. TdT 라벨링 전, Equilibration Buffer로 washing 하는 과정을 줄일 수 있습니다.
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