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Circulating Biomarkers ELISA

Standard 값이 나오지 않거나 너무 낮습니다. 이유가 무엇일까요?
아래의 사항들을 하나씩 확인해보세요.
  1. Standards를 상온에 두지 않으셨나요? Standards는 -20도에서 보관해야 합니다.
  2. Substrate와의 반응시간이 부족했을 수 있습니다. Substrate 반응을 좀 더 오래 진행해보세요.
  3. 시약의 유효기간을 확인해보세요.
  4. 샘플 incubation 후 plate washing 과정이 부적절하였을 수 있습니다.
  5. Conjugate incubation 후, 너무 많은 washing은 signal을 줄일 수 있습니다.
Background가 높게 나오는 이유는 무엇인가요?
아래의 여러가지 이유가 있을 수 있습니다.
  1. Plate washing 과정에서 문제가 발생할 수 있습니다. Conjugate incubation 이후, washing을 진행한 후에는 plate를 타월에 꾹 눌러 남아있는 시약을 제거해줍니다.
  2. 각 well 사이에 교차 오염이 발생했을 가능이 있습니다.
  3. Substrate가 너무 많이 희석되었거나 빛에 오랜시간 노출되지 않았는지 확인합니다. 그리고 각 well에 substrate가 제대로 넣어졌는지 확인합니다.
샘플 결과 값이 매우 높습니다. 어떻게 해야하나요?
Standard 범위 내에서 해당 biomarker를 측정할 수 있도록 각 제품의 프로토콜을 확인하여 1:10 혹은 1:100 등의 적절한 비율로 샘플을 희석하여 사용합니다.
최고 수준의 너무 높은 signal을 나타낼 때는 어떻게 해야하나요?
Substrate와의 반응을 너무 오랜 시간 시킬 경우 매우 높은 signal이 측정될 수 있습니다. 이럴 경우 Substrate를 버리고, plate를 한번 washing한 후, 새로운 substrate를 준비하여 첨가합니다. 그리고 짧은 시간내에 RFU 값을 측정합니다.
중복하여 실험한 RFU값의 차이가 매우 큰 경우, 왜 그런건가요?
Well간의 교차오염이 발생하였거나 reading하는 중 substrate의 거품이 문제가 되었을 수 있습니다. 분광 측정을 방해하기 때문에 substrate 첨가 후에는 well안에 형성된 공기방울을 제거해야합니다. 또한 중복 실험 중 pipetting의 실수로 인하여 시약이 손실되어 발생할 수 있습니다.